圓錐繡球 花園蕾絲 組培快繁技術研究.pdf

中國農(nóng)學通報 ChineseAgriculturalScienceBulletin 中國農(nóng)學通報 2023 39 31 76 82 ChineseAgriculturalScienceBulletin 基 金 項 目 江 蘇 省 農(nóng) 業(yè) 科 技 自 主 創(chuàng) 新 資 金 項 目 基 于 休 閑 農(nóng) 業(yè) 的 繡 球 花 特 色 資 源 挖 掘 與 綜 合 利 用 關 鍵 技 術 研 究 CX 22 2035 江 蘇 省 林 業(yè) 科 技 創(chuàng) 新 與 推 廣 項 目 繡 球 耐 寒 新 品 種 引 選 與 花 色 定 制 產(chǎn) 品 培 育 利 用 研 究 LYKJ 沭 陽 2021 01 國 家 林 草 局 林 草 國 家 創(chuàng) 新 聯(lián) 盟 重 點 研 發(fā) 項 目 繡 球 種 質(zhì) 資 源評價 創(chuàng)制與產(chǎn)業(yè)化開發(fā) GLM 2021 86 號 第 一 作 者 簡 介 鄧 衍 明 男 1976 年 出 生 安 徽 滁 州 人 研 究 員 博 士 研 究 方 向 為 花 卉 遺 傳 育 種 栽 培 技 術 與 分 子 生 物 學 通 信 地 址 210014 江 蘇 省 南 京市玄武區(qū)鐘靈街50 號 省農(nóng)科院休閑農(nóng)業(yè)研究所 Tel 025 84399306 E mail nksdym 收稿日期 2022 11 23 修回日期 2023 08 15 圓錐繡球 花園蕾絲 組培快繁技術研究 鄧衍明 1 2 秦紫藝 1 2 陳雙雙 1 邱 帥 3 馮 景 1 高 凱 3 齊香玉 1 陳慧杰 1 1 江蘇省農(nóng)業(yè)科學院休閑農(nóng)業(yè)研究所 江蘇省高效園藝作物遺傳改良重點實驗室 南京210014 2 南京農(nóng)業(yè)大學園藝學院 南京210008 3 杭州市園林綠化股份有限公司 杭州310009 摘 要 以圓錐繡球 花園蕾絲 的帶芽莖段為外植體 研究外植體消毒方法 基本培養(yǎng)基與植物生長調(diào)節(jié) 劑組合對其腋芽萌發(fā) 叢生芽增殖和不定根誘導的 效果 以及不同基質(zhì)對組培苗移栽 的影響 以不同有 效 氯 濃 度 的 次 氯 酸 鈉 溶 液 消 毒 不 同 時 間 處 理 進 行 消 毒 效 果 比 較 并 以MS 1 2MS WPM 1 2WPM 等 作 為 基 本 培 養(yǎng) 基 添 加 不 同 濃 度 的6 BA NAA 或IBA 進 行 側(cè) 芽 誘 導 增 殖 和 生 根 以 珍 珠 巖 蛭 石 泥 炭 配 比 成 不 同 的 基 質(zhì) 進 行 組 培 苗 的 移 栽 結(jié) 果 表 明 花 園 蕾 絲 外 植 體 最 佳 消 毒 方 法 是75 乙 醇 消 毒30s 后 經(jīng) 無 菌 水 沖 洗3 4 次 再 用 有 效 氯 濃 度2 0 的 次 氯 酸 鈉 溶 液 消 毒8 10min 最 后 用 無 菌 水 沖 洗4 6 次 腋 芽 萌 發(fā) 最 佳 培 養(yǎng) 基 為1 2WPM 2 0mg L6 BA 芽 增 殖 的 最 佳 培 養(yǎng) 基 為WPM 2 0mg L6 BA 0 2mg LIBA 誘 導 生 根 的 最 佳 培 養(yǎng) 基 為1 2WPM 0 3 0 5mg LIBA 組 培 苗 移 栽 最 佳 基 質(zhì) 為 按 等 體 積 比混勻的珍珠巖 蛭石和泥炭土 研究初步建立了圓錐繡球 花園蕾絲 的組培快繁技術體系 可為其工 廠化育苗和規(guī)模化生產(chǎn)提供技術支持 關鍵詞 圓錐繡球 離體培養(yǎng) 快繁技術 組培苗 外植體消毒 煉苗移栽 中圖分類號 S685 99 文獻標志碼 A 論文編號 casb2022 0980 Study on Tissue Culture Technology and Rapid Propagation of Hydrangea paniculata Garden Lace DENG Yanming 1 2 QIN Ziyi 1 2 CHEN Shuangshuang 1 QIU Shuai 3 FENG Jing 1 GAO Kai 3 QI Xiangyu 1 CHEN Huijie 1 1 Jiangsu Key Laboratory for Horticultural Crop Genetic Improvement Institute of Leisure Agriculture Jiangsu Academy of Agricultural Sciences Nanjing 210014 2 College of Horticulture Nanjing Agricultural University Nanjing 210008 3 Hangzhou Landscaping Incorporated Hangzhou 310009 Abstract The stem segments of Hydrangea paniculata Garden Lace with axillary buds were used as explants to study the sterilization protocol the effects of basic culture mediums and plant growth regulators on axillary buds germination multiple shoot proliferation and adventitious root induction and the influence of different substrates on the transplanting of tissue culture seedlings The sterilization effects of NaClO at various chlorine concentrations and treatment times were compared The treated axillary buds induction proliferation and rooting were taken on the basic mediums of MS 1 2MS WPM and 1 2WPM with different concentrations of 6 BA NAA or IBA The generated tissue culture seedlings were transplanted into various substrates that were mixed with peat perlite and vermiculite The results showed that the most suitable sterilization method was to soak the explant in 75 ethanol for 30 s followed by 3 4 washings with sterile water After that explants were treated with NaClO of 2 0 available chlorine concentration for 8 10 min followed by 4 60 引言 繡 球 花 在 歐 美 日 韓 等 地 種 植 普 遍 素 有 無 繡 球 不 成 園 之 說 被 譽 為 花 中 公 主 是 世 界 三 大 花 園 植 物 之 一 1 圓 錐 繡 球 為 繡 球 花 科 繡 球 花 屬 落 葉 灌 木 或 小喬木 具有開花量大 花期長 觀賞價值高 適應性強 等 優(yōu) 點 2 圓 錐 繡 球 的 花 序 碩 大 是 為 數(shù) 不 多 的 夏 季 開 花 植 物 雖 然 不 像 同 屬 的 大 花 繡 球 又 稱 大 葉 繡 球 有花色變化 或如櫟葉繡球有葉色變化 3 4 但其花期持 久 花色會在秋季轉(zhuǎn)為古銅色 而且花序能宿留枝頭長 時 間 不 脫 落 極 大 地 延 長 了 其 觀 賞 期 2 此 外 圓 錐 繡 球 耐 寒 耐 旱 抗 病 等 能 力 強 耐 修 剪 易 管 理 還 具 有 繡 球 屬 植 物 普 遍 具 有 的 耐 酸 耐 鋁 等 優(yōu) 良 特 性 5 7 因 此 圓錐繡球在國內(nèi)也越來越受到人們的青睞 如今江 蘇 安 徽 浙 江 山 東 甘 肅 等 地 都 有 較 多 栽 植 成 為 非 常重要的園林景觀和庭院美化樹種 8 圓 錐 繡 球 的 圓 錐 形 花 序 主 要 由 不 孕 花 組 成 大 多 數(shù) 品 種 不 產(chǎn) 生 種 子 9 一 些 野 生 種 和 少 數(shù) 栽 培 品 種 雖 能 產(chǎn) 生 種 子 但 結(jié) 實 率 較 低 且 種 子 常 表 現(xiàn) 為 不 育 或 育 性 很 低 8 如 馮 景 等 2 研 究 了 圓 錐 繡 球 石 灰 燈 種 子 的 萌 發(fā) 特 性 發(fā) 現(xiàn) 其 種 子 雖 然 不 存 在 形 態(tài) 和 物 理 休 眠 但 發(fā) 芽 率 較 低 且 污 染 率 很 高 從 而 影 響 發(fā) 芽 因 此 圓 錐 繡 球 傳 統(tǒng) 繁 殖 方 式 主 要 是 無 性 繁 殖 包 括 扦 插 分 株 壓 條 等 10 但 這 些 無 性 繁 殖 方 式 具 有 繁 殖 系 數(shù) 低 生 長 速 度 慢 受 季 節(jié) 限 制 等 缺 點 往 往 不 能 滿 足 規(guī) 模 化 生 產(chǎn) 在 短 期 內(nèi) 對 大 量 種 苗 的 需 求 11 而 植 物 組 織 培 養(yǎng) 技 術 能 夠 在 保 持 母 本 優(yōu) 良 性 狀 的 同 時 實 現(xiàn) 快 速 繁 殖 的 目 的 不 僅 能 夠 在 短 時 間 內(nèi) 獲 得 大 量 規(guī) 格 一 致 的 優(yōu) 質(zhì) 種 苗 滿 足 生 產(chǎn) 需 要 而 且 培 養(yǎng) 的 環(huán) 境 條 件 可 控 能 周 年 進 行 生 產(chǎn) 從 而 克 服 傳 統(tǒng) 育 苗 方 法 周 期 長 而 效 率 低 的 缺 點 在 植 物 基 因 工 程 分 子 育 種 等 領 域 都 具 有 重 要 作 用 12 繡 球 屬 植 物 組 織 培 養(yǎng) 技 術 已 有 研 究 以 大 花 繡 球 為 主 關 于 圓 錐 繡 球 的 研 究 則 相 對 較 少 13 如 王 紅 梅 等 9 14 對 圓 錐 繡 球 北 極 熊 和 粉 色 精 靈 進 行 了 組 培 快 繁 技 術 研 究 初 步 建 立 了 這 2 個 品 種 的 啟 動 培 養(yǎng) 增 殖 培 養(yǎng) 和 生 根 培 養(yǎng) 技 術 圓 錐 繡 球 花 園 蕾 絲 的 花 形 為 蕾 絲 帽 形 白 色 的 不 孕 花 環(huán) 繞 在 密 集 的 可 育 花 周 圍 花 序 整 體 呈 圓 錐 狀 后 期 花 色 會 變 為 淺 粉 色 既 可 孤 植 群 植 或 集 中 連 片 種 植 造 景 又 可 作 為 盆 花 鮮 切 花 干 花 使 用 具 有 較 高 的 觀 賞 生 態(tài) 和 經(jīng) 濟 價 值 是 深 受 市 場 歡 迎 的 優(yōu) 良 新 品 種 但 是 目 前 尚 無 花 園 蕾絲 組培 快繁 技術 方面 的 報 道 本 研 究 對 花 園 蕾 絲 各 離 體 培 養(yǎng) 階 段 進 行 試 驗 旨 在 形 成 高 效 的 種 苗 組 培 快 繁 技 術 體 系 為 其 工 廠 化 育 苗 和 規(guī) 模 化 生 產(chǎn) 提 供 技 術 支 持 1 材料與方法 1 1 試驗材料 試 驗 材 料 為 圓 錐 繡 球 花 園 蕾 絲 保 存 于 江 蘇 省 農(nóng) 業(yè) 科 學 院 繡 球 花 種 質(zhì) 資 源 圃 試 驗 于2021 年4 5 月 開 展 在 晴 天 上 午 剪 取 無 病 蟲 為 害 的 當 年 生 健 壯 嫩枝 底部用濕紙巾包裹好以防其失水 及時帶回實驗 室進行接種前處理 1 2 試驗方法 1 2 1 外植體消毒 外植體為所取嫩枝剪成的莖段 參 考 王 紅 梅 等 9 的 方 法 對 材 料 進 行 修 剪 去 葉 等 預 處 理 后 用 洗 潔 精 水 浸 泡5 min 洗 凈 浮 塵 后 自 來 水 沖 洗 60 90min 在 超 凈 工 作 臺 上 先 用70 乙 醇 消 毒30s 再 用 無 菌 水 沖 洗3 4 次 之 后 用 有 效 氯 濃 度 為1 0 2 0 3 0 的 次 氯 酸 鈉 NaClO 溶 液 分 別 處 理6 8 10 min 最 后 用 無 菌 水 沖 洗4 6 次 置 于 無 菌 濾 紙 上 吸 干 水 分 將 莖 段 兩 端 剪 去 保 留 長 度 為1 2cm 且 含1 個 節(jié) 正 向 豎 直 接 種 于 不 添 加 任 何 植 物 生 長 調(diào) 節(jié) 劑 的 MS 培 養(yǎng) 基 中 做 好 標 記 后 在 培 養(yǎng) 室 內(nèi) 培 養(yǎng) 2 周 后 統(tǒng) 計存活莖段數(shù)和污染莖段數(shù) 計算存活率和污染率 如 式 1 2 存活 率 存活 莖段數(shù) 接 種莖段 數(shù) 100 1 污染 率 污 染莖 段數(shù) 接 種莖 段數(shù) 100 2 1 2 2 啟 動 培 養(yǎng) 試 驗 設 計 為 不 同 類 型 的 基 本 培 養(yǎng) 基 MS 1 2MS WPM 1 2WPM 不 同 濃 度 細 胞 分 裂 素 6 BA 0 5 1 0 1 5 2 0 mg L 和 不 同 濃 度 生 長 素NAA 0 0 0 1 0 2 0 3mg L 的3 因 素4 水 平 正 交 試 驗 共16 washings with sterile water The best start up medium for axillary buds was 1 2WPM 2 0 mg L 6 BA for shoots was WPM 2 0 mg L 6 BA 0 2 mg L IBA and for rooting was 1 2 WPM 0 3 0 5 mg L IBA The best substrate for transplanting the plantlets was an equal amount of well mixed perlite vermiculite and peat The study developed a quick propagation system for H paniculata Garden Lace through tissue culture and provided a technical guidance for factory scale seedling development and mass production Keywords Hydrangea paniculata culture in vitro rapid propagation technology tissue culture seedling explant sterilization transplant seedling 鄧 衍 明 等 圓 錐 繡 球 花 園 蕾 絲 組 培 快 繁 技 術 研 究 77中國農(nóng)學通報 個 處 理 表1 將 外 植 體 離 體 培 養(yǎng) 獲 得 的 無 菌 苗 分 別 接種于不同處理的培養(yǎng)基中 置于組培架上培養(yǎng) 溫度 25 2 光 照 時 間16h d 每 瓶 接 種3 個 莖 段 每 處 理 接 種30 瓶 作 為 重 復 培 養(yǎng)30d 后 觀 察 腋 芽 萌 發(fā) 和 生 長 情 況 統(tǒng) 計 各 瓶 中 腋 芽 萌 發(fā) 莖 段 數(shù) 計 算 萌 芽 率 如式 3 萌 芽率 萌發(fā)莖 段 數(shù) 接 種莖段數(shù) 1 00 3 1 2 3 增 殖 培 養(yǎng) 試 驗 設 計 為 不 同 基 本 培 養(yǎng) 基 MS 1 2MS WPM 1 2WPM 不 同 濃 度 細 胞 分 裂 素6 BA 1 5 2 0 2 5 3 0 mg L 和 不 同 濃 度 生 長 素IBA 0 05 0 1 0 15 0 2 mg L 的3 因 素4 水 平 正 交 試 驗 共16 個 處 理 表2 將 啟 動 培 養(yǎng) 萌 發(fā) 的 腋 芽 切 割 成 帶 有1 2 個節(jié)的莖段 接種于不同處理的增殖培養(yǎng)基中 接種后 置 于 組 培 架 上 培 養(yǎng) 環(huán) 境 條 件 與 啟 動 培 養(yǎng) 相 同 每 瓶 接 種3 個 莖 段 每 處 理 接 種10 瓶 作 為 重 復 培 養(yǎng)30d 后 觀察各處理的芽增殖情況并統(tǒng)計增殖芽的數(shù)量 計 算增殖系數(shù) 如式 4 增 殖系數(shù) 增殖后芽數(shù) 接種莖段數(shù) 4 1 2 4 生根培養(yǎng) 選取增殖培養(yǎng)獲得的生長健壯的幼芽 進 行 生 根 培 養(yǎng) 試 驗 以1 2MS 和1 2WPM 作 為 基 本 培 養(yǎng) 基 分 別 添 加0 1 0 3 0 5 mg L 的IBA 共6 個 處 理 表3 每 瓶 接 種3 個 芽 每 處 理 接 種10 瓶 作 為 重 復 接 種 后20d 統(tǒng) 計 生 根 芽 數(shù) 和 每 芽 生 根 數(shù) 計 算 生 根 率 式 5 和平均生根數(shù) 生根率 生根 芽數(shù) 接種 芽數(shù) 1 00 5 1 2 5 煉 苗 移 栽 移 栽 前 先 將 組 培 瓶 移 至 散 射 光 下 室 溫培養(yǎng)3d 進行預煉苗 再打開封口膜置于溫室內(nèi)煉苗 3d 洗 凈 小 苗 根 部 殘 留 的 培 養(yǎng) 基 將 其 移 栽 至 已 滅 菌 的 不 同 物 質(zhì) 等 體 積 配 比 的4 種 基 質(zhì) 中 珍 珠 巖 蛭 石 泥 炭 土 1 1 1 珍 珠 巖 蛭 石 1 1 珍 珠 巖 泥 炭 土 1 1 蛭 石 泥 炭 土 1 1 移 栽 后7d 統(tǒng) 計 成 活 株 數(shù) 計 算 成 活 率 式 6 移栽后30d 測量小苗的株高和株幅 移 栽成 活率 成 活株數(shù) 移 栽株 數(shù) 10 0 6 1 2 6 數(shù) 據(jù) 處 理 與 統(tǒng) 計 分 析 試 驗 所 得 數(shù) 據(jù) 用Excel 2016 進 行 統(tǒng) 計 和 整 理 用SPSS 26 0 對 結(jié) 果 進 行 方 差 分析 2 結(jié)果與分析 2 1 不同處理對外植體消毒效果的影響 由圖1 2 可以看出 當有效氯濃度為1 0 時 不同 消 毒 時 間 下 外 植 體 的 污 染 率 無 顯 著 差 異 但 消 毒6min 表 1 啟動培養(yǎng)正交試驗設計表 表 2 增殖培養(yǎng)正交試驗設計表 處理編號 1 2 3 4 5 6 7 8 基本培養(yǎng)基 MS MS MS MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 6 BA 濃度 1 5 2 0 2 5 3 0 1 5 2 0 2 5 3 0 IBA 濃度 0 05 0 10 0 15 0 20 0 10 0 05 0 20 0 15 處理編號 9 10 11 12 13 14 15 16 基本培養(yǎng)基 WPM WPM WPM WPM 1 2WPM 1 2WPM 1 2WPM 1 2WPM 6 BA 濃度 1 5 2 0 2 5 3 0 1 5 2 0 2 5 3 0 IBA 濃度 0 15 0 20 0 05 0 10 0 20 0 15 0 10 0 05 處理編號 1 2 3 4 5 6 7 8 基本培養(yǎng)基 MS MS MS MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 6 BA 濃度 0 5 1 0 1 5 2 0 0 5 1 0 1 5 2 0 NAA 濃度 0 0 0 1 0 2 0 3 0 1 0 0 0 3 0 2 處理編號 9 10 11 12 13 14 15 16 基本培養(yǎng)基 WPM WPM WPM WPM 1 2WPM 1 2WPM 1 2WPM 1 2WPM 6 BA 濃度 0 5 1 0 1 5 2 0 0 5 1 0 1 5 2 0 NAA 濃度 0 2 0 3 0 0 0 1 0 3 0 2 0 1 0 0 mg L mg L 78和8min 的 污 染 率 接 近100 外 植 體 因 污 染 致 死 使 得 存 活 數(shù) 幾 乎 為0 消 毒10min 時 部 分 外 植 體 能 夠 存 活 但 存 活 率 只 有16 7 當 有 效 氯 濃 度 為2 0 時 消 毒8 min 和10 min 的 污 染 率 均 為43 3 顯 著 低 于 消 毒6min 處 理 的70 0 成 活 率 分 別 為40 0 和43 3 高 于 消 毒6 min 處 理 的26 7 但 消 毒8 min 和10 min 處理間的污染率和存活率均無顯著差異 當有效氯濃 度 為3 0 時 雖 然 外 植 體 的 污 染 率 隨 消 毒 時 間 的 增 加 而 降 低 但 外 植 體 受 到 消 毒 劑 的 傷 害 加 重 導 致 成 活 率 也 呈 下 降 趨 勢 在 消 毒10 min 時 降 至 最 低 值10 0 因 此 綜 合 考 慮 外 植 體 污 染 和 成 活 情 況 圓 錐 繡 球 花 園 蕾 絲 外 植 體 的 最 佳 消 毒 方 法 為 75 乙 醇 消 毒30s 后 無 菌 水 沖 洗3 4 次 再 用 有 效 氯 濃 度 為2 0 的 NaClO 溶液消毒8 10min 然后用無菌水沖洗4 6 次 2 2 不同處理對啟動培養(yǎng)的影響 啟 動 培 養(yǎng) 表4 結(jié) 果 表 明 不 同 基 本 培 養(yǎng) 基 和 植 物 生 長 調(diào) 節(jié) 劑 組 合 均 能 使 花 園 蕾 絲 休 眠 芽 萌 發(fā) 但 不 同 處 理 的 萌 芽 率 不 同 其 中 處 理16 1 2WPM 2 0mg L 6 BA 的 萌 芽 率 最 高 為98 9 其 次 是 處 理2 MS 1 0mg L6 BA 0 1mg LNAA 處 理5 1 2MS 0 5mg L 6 BA 0 1mg LNAA 和 處 理10 WPM 1 0mg L6 BA 0 3 mg LNAA 都 為95 6 處 理12 WPM 2 0 mg L 6 BA 0 1 mg L NAA 處 理13 1 2WPM 0 5 mg L 6 BA 0 3 mg LNAA 的 萌 芽 率 較 低 以 處 理13 的 萌 芽 率 為 最 低 只 有20 0 在 啟 動 培 養(yǎng) 過 程 中 萌 發(fā) 的 休 眠 芽 狀 態(tài) 良 好 均 可 用 于 后 續(xù) 的 增 殖 培 養(yǎng) 和 生 根 培 養(yǎng) 因 此 圓 錐 繡 球 花 園 蕾 絲 外 植 體 啟 動 培 養(yǎng) 的 最 佳培養(yǎng)基為處理16 即1 2WPM 2 0mg L6 BA 2 3 不同處理對增殖培養(yǎng)的影響 由 表5 可 知 各 處 理 均 能 使 圓 錐 繡 球 花 園 蕾 絲 腋 芽 增 殖 增 殖 系 數(shù) 為1 5 5 8 但 不 同 基 本 培 養(yǎng) 基 和 不 同 激 素 組 合 對 腋 芽 增 殖 的 影 響 不 同 處 理1 2 3 5 7 8 15 的 增 殖 系 數(shù) 均 較 低 而 處 理10 WPM 2 0 mg L 6 BA 0 2 mg L IBA 的 增 殖 系 數(shù) 最 高 為 5 8 其 次 是 處 理9 WPM 1 5 mg L6 BA 0 15 mg L IBA 增 殖 系 數(shù) 為4 7 以MS 為 基 本 培 養(yǎng) 基 時 處 理 表 4 不同處理對外植體萌芽率的影響 處理 1 2 3 4 萌芽率 90 0 2 7b 95 6 2 0ab 72 2 3 8d 84 4 3 0c 處理 5 6 7 8 萌芽率 95 6 2 0ab 93 3 2 4b 67 8 3 3d 84 4 3 0c 處理 9 10 11 12 萌芽率 71 1 3 7d 95 6 2 2ab 72 2 3 1d 46 7 5 7e 處理 13 14 15 16 萌芽率 20 0 4 0f 66 7 4 1d 80 0 2 9c 98 9 1 1a 表 3 生根培養(yǎng)處理 處理編號 1 2 3 4 5 6 基本培養(yǎng)基 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2WPM 1 2WPM 1 2WPM IBA 濃度 mg L 0 1 0 3 0 5 0 1 0 3 0 5 不同小寫字母表示處理間差異顯著 P 0 05 下同 圖 1 外植體在 NaClO 溶液中不同消毒時間的污染情況 有 效 氯 濃 度 外 植 體 污 染 率 圖 2 外植體在 NaClO 溶液中不同消毒時間的成活情況 有 效 氯 濃 度 外 植 體 存 活 率 鄧 衍 明 等 圓 錐 繡 球 花 園 蕾 絲 組 培 快 繁 技 術 研 究 79中國農(nóng)學通報 1 4 大 部 分 增 殖 芽 矮 小 且 葉 片 發(fā) 黃 其 中 處 理4 MS 3 0mg L6 BA 0 2mg LNAA 雖然增 殖系數(shù) 較 高 2 7 但 增 殖 芽 矮 小 葉 片 發(fā) 黃 且 基 部 有 愈 傷 組 織 形 成 以1 2MS 為 基 本 培 養(yǎng) 基 時 處 理5 8 以 處 理6 1 2MS 2 0 mg L6 BA 0 05 mg LNAA 的 增 殖 系 數(shù) 最 高 為 3 1 顯 著 高 于 其 他3 個 處 理 且 葉 色 正 常 只 有 微 量 愈 傷 組 織 形 成 但 同 樣 存 在 增 殖 芽 矮 小 的 現(xiàn) 象 以WPM 為 基 本 培 養(yǎng) 基 時 處 理9 12 以 處 理10 WPM 2 0 mg L 6 BA 0 2mg LNAA 的 增 殖 效 果 最 好 增 殖 系 數(shù) 顯 著 高 于 其 他3 個 處 理 且 增 殖 芽 生 長 良 好 葉 色 正 常 無 愈 傷 組 織 形 成 以1 2WPM 為 基 本 培 養(yǎng) 基 時 處 理13 16 雖然 總體 上增 殖芽 生長 良好 葉色 正常 但增 殖系 數(shù) 均 顯 著 低 于 處 理10 其 中 處 理15 1 2WPM 2 5mg L 6 BA 0 1mg LNAA 的 增 殖 系 數(shù) 最 低 只 有1 5 因 此 綜 合 分 析 增 殖 系 數(shù) 和 增 殖 芽 的 生 長 狀 態(tài) 圓 錐 繡 球 花 園 蕾 絲 最 佳 增 殖 培 養(yǎng) 基 為 處 理10 即WPM 2 0mg L6 BA 0 2mg LIBA 2 4 不同處理對生根培養(yǎng)的影響 基 本 培 養(yǎng) 基 和IBA 對 花 園 蕾 絲 生 根 率 和 平 均 生 根 數(shù) 均 具 有 顯 著 影 響 基 本 培 養(yǎng) 基 為1 2MS 時 各 處 理 生 根 數(shù) 均 為0 而 基 本 培 養(yǎng) 基 為1 2WPM 時 各 處 理 生 根 率 都 接 近 或 達 到100 其 中 處 理5 1 2WPM 0 3 mg LIBA 和 處 理6 1 2WPM 0 5 mg LIBA 的 生 根 率 均 為100 平 均 生 根 數(shù) 也 顯 著 高 于 其 他 處 理 分 別 為7 90 和8 33 條 株 因 此 圓 錐 繡 球 花 園 蕾 絲 生 根培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基為1 2WPM 0 3 0 5mg LIBA 2 5 不同基質(zhì)對組培苗移栽的影響 移 栽7 d 后4 個 處 理 的 移 栽 成 活 率 都 為100 但 不 同 處 理 的 株 高 不 同 其 中 處 理1 珍 珠 巖 蛭 石 泥 炭 土 1 1 1 株 高 為3 43 cm 顯 著 高 于 其 他3 個 處 理 其 次 為 處 理3 珍 珠 巖 泥 炭 土 1 1 株 高 為2 82 cm 處理2 珍珠 巖 蛭石 1 1 處理4 蛭石 泥炭 土 1 1 的 株 高 無 顯 著 差 異 分 別 為2 07 1 97cm 4 個 處 理 的 株 幅 變 化 趨 勢 與 株 高 相 似 處 理2 處 理4 的 株 幅 較 小 分 別 為5 36 5 01cm 而 處 理1 處 理3 的 株 幅 較 大 分 別 為6 98 6 90 cm 因 此 圓 錐 繡 球 花 園 蕾 絲 組 培 苗 的 最 佳 移 栽 基 質(zhì) 為 處 理1 即 等 體 積 比 混 勻 的 珍 珠 巖 蛭石和泥炭土 3 結(jié)論 本 研 究 通 過 設 置3 種 有 效 氯 濃 度 的NaClO 溶 液 分 別 處 理 不 同 時 間 確 定 了 圓 錐 繡 球 花 園 蕾 絲 外 植 體 消 毒 的 最 佳 方 法 是 經(jīng)75 乙 醇 消 毒30s 后 無 菌 水 沖 洗3 4 次 再 用 有 效 氯 濃 度 為2 0 的NaClO 溶 液 消 毒 8 10min 然 后 用 無 菌 水 沖 洗4 6 次 后 用 無 菌 濾 紙 吸 干 水 分 即 可 用 于 接 種 通 過 分 別 設 置16 種 啟 動 培 養(yǎng) 基 和 增 殖 培 養(yǎng) 基 配 方 試 驗 發(fā) 現(xiàn) 外 植 體 最 佳 啟 動 培 養(yǎng) 基 是1 2WPM 2 0 mg L 6 BA 最 佳 增 殖 培 養(yǎng) 基 是 WPM 2 0 mg L 6 BA 0 2 mg L IBA 通 過 設 置6 種 不 同 生 根 培 養(yǎng) 基 處 理 發(fā) 現(xiàn) 最 佳 生 根 培 養(yǎng) 基 是 1 2WPM 0 3 0 5 mg LIBA 生 根 效 果 良 好 通 過 將 煉 苗 后 的 組 培 苗 移 栽 到4 種 不 同 基 質(zhì) 中 進 行 生 長 發(fā) 現(xiàn) 最 佳 移 栽 基 質(zhì) 是 等 體 積 比 混 勻 的 珍 珠 巖 蛭 石 和 泥 炭土 本研究初步建立了圓錐繡球 花園蕾絲 的離體 培 養(yǎng) 和 快 繁 技 術 體 系 研 究 結(jié) 果 可 為 其 工 廠 化 育 苗 和 規(guī)?；a(chǎn)提供技術支撐 4 討論 植 物 在 生 長 的 過 程 中 易 因 環(huán) 境 的 影 響 而 攜 帶 各 種病原微生物 因此 對外植體進行消毒非常重要 是 成 功 建 立 組 培 快 繁 體 系 的 第 一 步 如 果 消 毒 不 徹 底 會 導 致 外 植 體 因 污 染 而 死 亡 如 果 消 毒 劑 濃 度 過 高 或 處 理 時 間 過 長 又 會 對 外 植 體 自 身 造 成 傷 害 甚 至 致 其 死 亡 因 此 選 擇 合 適 的 消 毒 劑 及 恰 當 的 消 毒 處 理 時 間 非 常 關 鍵 15 本 研 究 發(fā) 現(xiàn) 圓 錐 繡 球 花 園 蕾 絲 帶 芽 莖 段 使 用75 乙 醇 和NaClO 溶 液 作 為 消 毒 劑 時 隨 著 消 毒 劑 濃 度 的 增 加 和 消 毒 時 間 的 延 長 外 植 體 污 染 率 均 有 所 降 低 但 存 活 率 并 不 都 呈 上 升 趨 勢 試 驗 結(jié) 果表明 花園蕾絲 可能表面攜帶的菌類較多 或者內(nèi) 生 菌 較 多 這 與 王 紅 梅 等 9 在 圓 錐 繡 球 北 極 熊 上 發(fā) 表 5 幼芽在不同處理下的增殖系數(shù)和生長狀態(tài) 處理 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 增殖系數(shù) 1 5 0 2f 1 7 0 1f 1 5 0 2f 2 7 0 1e 1 6 0 2f 3 1 0 1de 1 7 0 1f 1 9 0 1f 4 7 0 2b 5 8 0 2a 3 2 0 1d 2 9 0 1de 3 9 0 2c 4 1 0 1c 1 5 0 2f 4 0 0 2c 增殖芽生長狀態(tài) 矮小 葉色正常 大量愈傷 矮小 葉片發(fā)黃 無愈傷 矮小 葉片發(fā)黃 無愈傷 矮小 葉片發(fā)黃 有愈傷 生長良好 葉片發(fā)黃 無愈傷 矮小 葉色正常 微量愈傷 矮小 葉色正常 有愈傷 生長良好 葉色正常 有愈傷 矮小 葉片發(fā)黃 無愈傷 生長良好 葉色正常 無愈傷 矮小 葉片發(fā)黃 無愈傷 生長良好 葉片正常 無愈傷 生長良好 葉色正常 有愈傷 矮小 葉色正常 無愈傷 生長良好 葉色正常 無愈傷 生長良好 葉色正常 少量愈傷 80現(xiàn) 的 結(jié) 果 類 似 因 此 本 試 驗 中 先 用70 乙 醇 浸 泡 處 理30s 利 用 乙 醇 的 強 穿 透 力 使 菌 體 蛋 白 變 性 再 用 有 效 氯 濃 度2 0 的NaClO 溶 液 浸 泡 可 得 到 較 好 的 消 毒 效 果 但 本 研 究 結(jié) 果 顯 示 的 污 染 率 仍 較 高 成 活 率 也 有 提 升 的 空 間 白 一 葦 等 16 為 解 決 組 培 中 的 污 染 問 題 在 培 養(yǎng) 基 中 添 加 了 抗 生 素 滅 菌 劑 等 物 質(zhì) 從 而 探 索出一種用藥液對外植體進行包衣處理的抗污染新方 法 成效顯著 故在今后的試驗中 尚需進一步研究更 加 高 效 的 外 植 體 消 毒 和 滅 菌 方 法 以 進 一 步 完 善 圓 錐 繡球 花園蕾絲 的無菌培養(yǎng)技術體系 不 同 基 本 培 養(yǎng) 基 類 型 對 不 同 植 物 的 離 體 培 養(yǎng) 效 果 存 在 很 大 差 異 本 研 究 發(fā) 現(xiàn) 啟 動 培 養(yǎng) 時 MS 和 1 2MS 培 養(yǎng) 基 的 萌 芽 率 均 較 高 這 與 雷 亞 靈 17 的 研 究 結(jié)果相同 這可能是因為圓錐繡球 花園蕾絲 休眠芽 在 萌 發(fā) 階 段 對 銨 鹽 的 需 求 較 大 但 在 增 殖 培 養(yǎng) 中 WPM 培 養(yǎng) 基 的 增 殖 系 數(shù) 顯 著 高 于 其 他 培 養(yǎng) 基 與 MS 培 養(yǎng) 基 相 比 WPM 培 養(yǎng) 基 中 銨 鹽 的 含 量 較 低 而 硫 酸 鹽 含 量 增 加 18 因 此 圓 錐 繡 球 花 園 蕾 絲 在 增 殖 培 養(yǎng) 的 過 程 中 可 能 對 銨 鹽 的 需 求 有 所 下 降 而 對 硫 酸 鹽 的 需 求 上 升 在 生 根 培 養(yǎng) 時 1 2WPM 的 生 根 效 果 顯 著 好 于1 2MS 這 與 李 楊 麗 19 的 研 究 結(jié) 果 類 似 在 其 開 展 的 研 究 中 B5 和WPM 培 養(yǎng) 基 都 比MS 培 養(yǎng) 基 更加適合繡球的離體培養(yǎng) 在 不 同 培 養(yǎng) 階 段 不 同 的 激 素 配 比 對 組 培 苗 的 生 長 影 響 顯 著 需 要 不 斷 進 行 優(yōu) 化 本 試 驗 在 啟 動 增 殖 生 根 培 養(yǎng) 的 過 程 中 分 別 采 用 了 不 同 濃 度 的6 BA NAA 和IBA 作 為 生 長 調(diào) 節(jié) 劑 結(jié) 果 表 明 在 啟 動 培 養(yǎng) 中 花 園 蕾 絲 的 萌 芽 率 總 體 較 高 說 明 其 休 眠 芽 較 易 萌 發(fā) 隨 著6 BA 濃 度 的 上 升 萌 芽 率 先 上 升 后 下 降 這 與Liu 等 20 的 研 究 結(jié) 果 非 常 相 似 此 外 隨 著NAA 濃 度 的 增 加 萌 芽 率 降 低 說 明NAA 在 一 定 程 度 上 抑 制 了 芽 的 萌 發(fā) 在 增 殖 培 養(yǎng) 中 隨 著6 BA 濃 度 的 上 升 增 殖 系 數(shù) 先 上 升 后 下 降 與 殷 麗 青 等 21 對 粗 齒 繡 球 的 研 究 結(jié) 果 一 致 在 生 根 培 養(yǎng) 中 本 研 究 發(fā) 現(xiàn) 花 園 蕾 絲 組 培 苗 的 生 根 相 對 較 容 易 不 同 處 理 的 生 根 率 均 接 近 或 達 到100 但 生 根 數(shù) 隨 著IBA 濃 度 的 升 高 而 增 加 說 明 在 一 定 濃 度 范 圍 內(nèi) IBA 具 有 促 進 其 生 根 的 作 用 黃 烈 健 等 22 認 為 生 根 培 養(yǎng) 時 IBA 和NAA 同 時 使 用 的 效 果 遠 好 于 單 獨 使 用 其 中 任 一 種 激 素 的 效 果 陳 爽 等 23 在 對 野 生 蠟 蓮 繡 球 和 純 蘭 繡 球 進 行 組 培 快 繁 技 術 研 究 時 發(fā) 現(xiàn) 較 適 宜 的 生 根 培 養(yǎng) 基 都 是IBA 和NAA 同 時 使 用 的 培 養(yǎng) 基 周 余 華 等 24 在 對 圓 錐 繡 球 石 灰 燈 進 行 扦 插 育 苗 時 發(fā) 現(xiàn) NAA 和ABT 是 最 佳 生 根 劑 李 露 等 25 在 開 展 非 洲 紫 羅 蘭 離 體 快 繁 研 究 時 發(fā) 現(xiàn) IAA 和NAA 誘 導 側(cè) 芽 生 根 的 效 應 相 同 因 此 未 來 有 必 要 開 展 更 多 生 長 調(diào) 節(jié) 劑 的 篩 選 和 比 較 試 驗 尤 其 是NAA 或IAA 及 其 與IBA ABT 等 的 配 合 使 用 試 驗 以 進 一 步 改 良 花 園 蕾 絲 的 生 根 培 養(yǎng) 基 配 方 參考文獻 1 陳 慧 杰 鄧 衍 明 齊 香 玉 等 繡 球 葉 斑 病 病 原 鑒 定 及 其 生