月季白粉病孢子形態(tài)觀測(cè)與病害調(diào)查_(kāi)楊忠義.pdf

山西農(nóng)業(yè)科學(xué) 2018， 46（ 3）： 449-452 Journal of Shanxi Agricultural Sciences月季白粉病孢子形態(tài)觀測(cè)與病害調(diào)查楊忠 義 ，趙 偉 ，羅堯幸 ，韓 凱 ，楊 杰 ，劉 濤 ，王靜波 ，劉榕晨 ，紀(jì) 薇（ 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院， 山西 太谷 030801）摘 要 ：選取山西農(nóng)業(yè)大學(xué)不同區(qū)域生長(zhǎng)的月季 ， 對(duì) 其病情指數(shù)進(jìn)行調(diào)查，同時(shí)設(shè)置不同溫度梯度進(jìn)行月季白粉病菌孢子萌發(fā)培養(yǎng)試驗(yàn)，顯微觀測(cè)其白粉病菌孢子的萌發(fā)動(dòng)態(tài) 。結(jié)果表明，月季白粉病孢子萌發(fā)的最適溫度為32；栽培區(qū)域位于 A（ N37.424°， E 112.579°）， B（ N37.422°， E 112.584°）和 C（ N37.422°， E 112.580°）的月季感病程度分別為中抗（ MR） 、抗病（ R）和高抗（ VR） 。研究可為了解月季白粉病發(fā)生機(jī)理提供理論基礎(chǔ)，對(duì)篩選抗白粉病月季品種和指導(dǎo)月季栽培管理、 白粉病防治具有重要實(shí)踐意義。關(guān)鍵 詞 ：月季；白粉?。?發(fā)病指數(shù)； 白粉病孢子形態(tài)中圖 分 類號(hào) ：S436.85 文獻(xiàn) 標(biāo) 識(shí)碼 ：A 文章 編 號(hào) ：1002-2481（ 2018） 03-0449-04Spores Morphology Observation and Disease Investigationof Sphaerotheca pannosa in Chinese roseYANGZhongyi， ZHAOWei， LUOYaoxing， HANKai， YANGJie， LIUTao， WANGJingbo， LIURongchen， JI Wei（ College ofHorticulture， Shanxi Agricultural University， Taigu 030801， China）Abstract： In this experiment, Rosa hybrida was selected from different regions as the test material, and the disease index wasinvestigated. Meanwhile, different temperature gradients were used to prepare spore germination culture experiment for powdery mildewof Rosa hybrida, and the germination dynamics of powdery mildew was observed by microscope. The results showed that the optimumtemperature for germination of rose powdery mildew was 32 . The degree of disease susceptibility on rose in cultivated area A（ N37.424°， E 112.579°） , B（ N37.422°， E 112.584°） and C（ N37.422°， E 112.580°） were moderate resistance（ MR） , resistance（ R） , highresitance（ HR） . This study provides a theoretical basis for understanding the occurrence mechanism of rose powdery mildew, and hasimportant practical significance for screening and breeding of Rosa hybrida varieties and guiding the cultivation management andpowderymildewcontrol ofrose.Key words： Chinese rose; powderymildew; disease index; the spore morphologyofSphaerotheca pannosa收稿 日 期 ：2017- 11- 13基 金 項(xiàng) 目 ：山西省高等學(xué)?？萍紕?chuàng)新項(xiàng)目 （ 2016153） ；山西農(nóng)業(yè)大學(xué)引進(jìn)人才博士科研啟動(dòng)基金項(xiàng)目（ 2013YJ22）；山西省高等學(xué)校優(yōu)秀青年學(xué)術(shù)帶頭人（ 2017）作者簡(jiǎn) 介 ：楊忠義（ 1967-） ， 男，山西芮城人，副教授，博士，主要從事藥用植物選育及副產(chǎn)品開(kāi)發(fā)利用研究工作。紀(jì) 薇為通信作者。doi:10.3969/j.issn.1002-2481.2018.03.33月季 （ Rosa hybrida）被譽(yù)為花中皇后，屬于薔薇科（ Rosaceae）薔薇屬（ Rosa）植物1。作為 我 國(guó)傳統(tǒng)十大名花之一，月季既可作為觀賞植物，也可作為藥用植物，其株型繁多 、姿色多樣 、適應(yīng)力強(qiáng) 、便于管理，深受人們的喜愛(ài)，已成為園林綠化的重要植物2-3。白粉 病 （ Sphaerotheca pannosa（ Wallr.） Lev）是月季的主要病害之一4，其是由白粉病菌 （ Podosphaerapannosa）專性寄生于月季上導(dǎo)致的，不僅使月季的觀賞價(jià)值降低，還使植株的生長(zhǎng)受到影響5。白粉病菌主要侵染月季的綠色器官， 葉片 、花 器 、嫩梢發(fā)病重。 病菌主要以菌絲在病梢、 病葉、 病蕾上及芽?jī)?nèi)等處過(guò)冬6。近年來(lái)，月季種植地區(qū)和規(guī)模不斷增 加 ，危害呈加重趨勢(shì)，該病可引起葉片卷曲 、枯焦，嫩梢可枯死，花不能開(kāi)放或花姿不整，影響切花的觀賞價(jià)值和產(chǎn)量，給月季產(chǎn)業(yè)造成了很大危害7。本試驗(yàn)選取山西農(nóng)業(yè)大學(xué)校園內(nèi)不同區(qū)域的染白粉病月季， 進(jìn)行病指調(diào)查以及實(shí)驗(yàn) 室月季白粉病菌孢子形態(tài)觀察和其在不同溫度梯度下的萌發(fā)培養(yǎng)試驗(yàn)，旨在為日后月季白粉病防治工作提供良好的理論依據(jù)。1 材料 和 方法1.1 材料 和 儀器研究材料為山西農(nóng)業(yè)大學(xué)校園內(nèi)不同區(qū) 域的 不同品種藤本月季染病葉片，取材地點(diǎn)分別為449· ·山西農(nóng)業(yè)科學(xué) 2018 年第 46 卷第 3 期A（ N 37.424°， E 112.579°）， B（ N37.422°， E 112.584°）和 C（ N37.422°， E 112.580°） 。主要設(shè)備儀器：恒溫培養(yǎng)箱（ DHP- 9272，中國(guó)上海） 、冰箱、 數(shù)碼顯微鏡（ OLYMPUSDP71） 。1.2 試驗(yàn) 方 法1.2.1 月季白粉病孢子侵染葉片動(dòng)態(tài)過(guò)程觀察與萌發(fā)培養(yǎng) 月季白粉病孢子在葉片的侵染過(guò) 程觀察采用文獻(xiàn) 8的方法進(jìn)行；白粉病孢子在培養(yǎng)基中萌發(fā)過(guò)程觀察按照文獻(xiàn) 9的方法進(jìn)行；不同溫度下月季白粉病孢子萌發(fā)率試驗(yàn)采用文獻(xiàn) 9的方法進(jìn)行，即將培養(yǎng)皿分別在 4， 20， 24， 28， 32， 36下培養(yǎng)， 12 h 后，每隔 4 h 鏡檢孢子萌發(fā)的數(shù)量。1.2.2 月季白粉病葉片病情指數(shù)調(diào)查 采用文獻(xiàn)1的方法對(duì)供試材料的抗性進(jìn)行自然鑒定 。于月季白粉病發(fā)生盛期（ 2016- 08- 2909- 01），對(duì)學(xué)校月季生長(zhǎng)區(qū)域進(jìn)行調(diào)查，每小區(qū)隨機(jī) 3 點(diǎn)取樣，每點(diǎn)隨機(jī)選取 200 個(gè)葉片，共 600 片葉 。按照月季白粉病分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病害調(diào)查（表 1， 2），計(jì)算病情指數(shù) 。感病指數(shù)（ SI） （病級(jí)值 ×該級(jí)發(fā)病葉數(shù)）調(diào)查總?cè)~數(shù) ×最高病級(jí) 值×100；孢 子 萌發(fā)率 視野內(nèi)萌發(fā)孢子數(shù) / 視野內(nèi)萌發(fā)與未萌發(fā)的孢子總數(shù)×100%。1.3 數(shù)據(jù) 分 析利用 SPSS 17.0 和 Excel 2007 進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析，并采用 Duncan 新復(fù)極差法（ P0.05） 。2 結(jié)果 與 分析2.1 月季白粉病孢子葉片內(nèi)部侵染動(dòng)態(tài)過(guò)程觀察月季孢子萌發(fā)后將吸器伸入寄主細(xì)胞內(nèi)吸取營(yíng)養(yǎng)， 分生孢子梗通常上下等徑， 薄壁，其長(zhǎng)度往往受地區(qū) 、生長(zhǎng)環(huán)境 、寄主生長(zhǎng)部位等的影響而差別很大10。月季葉片上的白粉病菌菌絲數(shù)量隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸增 加 （圖 1） 。4 h 后可見(jiàn)由白粉病孢子萌發(fā)形成的分生孢子梗； 8 h 后形成的菌絲數(shù)量明顯增多，大量分生孢子梗出現(xiàn)； 12 h 后葉片表皮細(xì)胞已不存在完整結(jié)構(gòu)，葉片出現(xiàn)彎曲。2.2 月季白粉病孢子在培養(yǎng)基中萌發(fā)過(guò)程觀察在光學(xué)顯微鏡視野中， 出 現(xiàn)大量月季白粉病孢子（圖 2- A），隨著培養(yǎng)時(shí)間增長(zhǎng)，月季白粉病孢子開(kāi)始產(chǎn)生分生孢子梗及芽管（圖 2- B和 2- C） 。在圖2- D 和 2- E 中，通過(guò)光學(xué)顯微鏡低倍鏡（ 4×10）可以觀察到培養(yǎng)基中遍布由孢子萌發(fā)產(chǎn)生的菌絲體，高倍視野中可以看到明顯的分生孢子和分生孢子梗（ 40×10） 。2.3 不同溫度下月季白粉病孢子萌發(fā)率統(tǒng)計(jì)從圖 3 可 以 看出，月季白粉病孢子在 436表 1 月季白粉病病情鑒定分級(jí)病級(jí)013579發(fā)病程度 /%無(wú)病斑55.11010.12525.15050.1注：發(fā)病程度指病斑面積占整個(gè)葉片面積的百分比 。表 2 月季白粉病感病程度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)感病指數(shù)（ SI）010102020303040405050 以上感病程度高抗（ HR）抗?。?R）中抗（ MR）中感（ MS）感?。?S）高感（ HS）450· ·楊忠義等：月季白粉病孢子形態(tài)觀測(cè)與病害調(diào)查表 3 不同栽培區(qū)域月季白粉病自然鑒定分級(jí)栽培區(qū)域ABC感病指數(shù)（ SI）26.8±13.7a16.5±7.3a6.1±2.2a感病程度中抗（ MR）抗?。?R）高抗（ HR）均可萌發(fā)。 不同培養(yǎng)溫度下， 隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)， 孢子萌發(fā)率呈現(xiàn)增長(zhǎng)趨勢(shì)。 月季白粉病孢子在培養(yǎng)基中培養(yǎng) 4 h，當(dāng)培養(yǎng)溫度在 32時(shí)，孢子萌發(fā)率（ 45.8%） 顯著高于 4 （ 30.7%）， 24 （ 32.4%）和36（ 28.1%）時(shí)萌發(fā)率，與 28（ 39.5%）萌發(fā)率差異不顯著；孢子培養(yǎng) 8 h 時(shí)，萌發(fā)率隨時(shí)間延長(zhǎng)不呈遞增趨勢(shì)，培養(yǎng)溫度在 28（ 59.9%）和 32（ 70.3%）顯著高于 4（ 38.8%）， 20（ 27.9%）， 24（ 44.6%）和 36 （ 37.7%）；孢子培養(yǎng) 12 h 時(shí)，培養(yǎng)溫度在32 時(shí)，孢子萌發(fā)率達(dá)到最大值（ 71.0%），顯著高于其他溫度： 28（ 56.4%） 24（ 55.7%） 4（ 47.7%） 36（ 37.7%） 20（ 34.9%） 。由此可知，月季白粉病孢子萌發(fā)最適溫度為 32。2.4 月季白粉病病情指數(shù)調(diào)查當(dāng)月季感染白粉病，葉片會(huì)發(fā)生 一 定 的畸形，葉片皺縮卷曲，葉背出現(xiàn)白色小粉斑，嚴(yán)重時(shí)，葉面布滿圓形或者不規(guī)則形的白斑2（圖 4） 。由 表 3 可知， 月季在不同栽培區(qū)域白粉病均有發(fā)生，位于 A， B 和 C 區(qū)的月季感病程度分別為中抗（ MR） 、抗?。?R）和高抗（ HR），感病指數(shù)（ SI）不存在顯著性差異 。表明栽培在不同區(qū)域的月季，由于溫度、 濕度的不同，抗白粉病能力也存在差異11。3 結(jié)論 與 討論近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)月季 白粉病進(jìn)行了相關(guān)研究， 如月季白粉病的病原菌 、發(fā)病規(guī)律及寄主 、病原關(guān)系12、抗 性 基 因13-15等 方 面 。然而眾多研究發(fā)現(xiàn) ，培育抗病品種是控制月季白粉病最經(jīng)濟(jì) 、有效的方法16。為獲 得 月季抗白粉病品種，了解月季白粉病菌孢子形態(tài)是最重要的前提條件 。在本試驗(yàn)中，葉面病菌的染色是制片的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，不同的染色方法會(huì)直接影響最終結(jié)果。 一般要先進(jìn)行組織透明處理，以減少葉片色素，但處理以后的組織透性增強(qiáng)，染料容易進(jìn)入 。本試驗(yàn)采用臺(tái)盼藍(lán)染色，效果明顯，易操作 。本試驗(yàn)中，月季白粉菌分生孢子在 436均可萌發(fā)，萌發(fā)的最適溫度為 32，與鄭坤等17-18研究稍有不同，關(guān)于月季白粉菌分生孢子 萌 發(fā)的最適溫度尚需進(jìn)一步研究 。張斌等11研究 表 明，分生孢子的萌發(fā)受相對(duì)濕度的影響很大，最適的相對(duì)濕度為 97%99%。當(dāng)?shù)陀?95%時(shí)萌發(fā)率就很低18，當(dāng)夜 間 月季栽培區(qū)域溫度較低 、濕度較大時(shí)，可導(dǎo)致月季白粉菌分生孢子萌發(fā)，之后的高溫則會(huì)促進(jìn)分生孢子形成，并釋放到環(huán)境中進(jìn)而再次侵染。 因此，月季栽培者要注意控制環(huán)境條件，避免有利白粉病孢子萌發(fā)并擴(kuò)展的條件，降低栽培者的經(jīng)濟(jì)損失。本試驗(yàn)對(duì)山西農(nóng)業(yè)大學(xué)校園栽培區(qū)域 A， B 和C 進(jìn)行抗病性自然鑒定，結(jié)果表明， A， B， C 區(qū)所引種栽培的月季品種普遍具有一定的抗病性，這同時(shí)也與栽培區(qū)域的地理環(huán)境有關(guān)19。李社 增 等20研究發(fā)現(xiàn)， 利用一個(gè)年度計(jì)算的相對(duì)病情指 數(shù)劃分品種的抗病性，僅僅是一定概率下的抗病性 。但以感病指數(shù)表示一個(gè)品種的抗病性，能夠在很大程度上降低年度間的變異，因此，適當(dāng)延長(zhǎng)觀測(cè)時(shí)間及重復(fù)次數(shù)，既有助于更加全面 、準(zhǔn)確的掌握月季品種對(duì)白粉病的抗性，也能夠在一定程度上增加結(jié)果的可451· ·（上接 第 440 頁(yè) ） 12曲 田 麗，張淑穎，金玉蘭 . 合歡內(nèi)生菌 H8 的分離 、鑒定及其抗菌代謝物質(zhì)研究J. 華北農(nóng)學(xué)報(bào)， 2015， 30（ 1）： 54- 60. 13吳紅玉，鄭美艷，許敏，等 . 核桃內(nèi)生菌 HT- 6 發(fā)酵濾液的抑菌作用研究J. 山西農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2015， 43（ 10）： 1315- 1317. 14 YANGK， YUM， SHENYH， et al. 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