生長(zhǎng)素酰胺水解酶基因在西瓜果實(shí)發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)_高嬙.pdf

黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué) （）： ：生長(zhǎng)素酰胺水解酶基因在西瓜果實(shí)發(fā)育過(guò) 程 中的表達(dá)高嬙，田守 蔚，張潔，王艷 萍，孫宏 賀，張海 英，許勇（北京 農(nóng)學(xué)院 植物科學(xué)技術(shù)學(xué)院 ，北京；北京 市農(nóng)林科學(xué)院 蔬菜研究中心 農(nóng)業(yè)部華北地區(qū)園藝作物生物學(xué)與種質(zhì)創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 蔬菜種質(zhì)改良北京重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 ，北京）摘 要 ：生長(zhǎng)素在植物果實(shí)發(fā)育與成熟過(guò)程中發(fā)揮重要作用 ，但生長(zhǎng)素調(diào)控西瓜果實(shí)發(fā)育與成熟的分子機(jī)制尚不 十分清楚 。以含糖量低的野生西瓜 與含糖量高的栽培西瓜 為試 驗(yàn)材料 ，測(cè)定并比較了栽培與野生西瓜果實(shí)發(fā)育不同時(shí)期果實(shí)整組織游離態(tài) 的含 量 。結(jié)果表明 ：果實(shí)游離態(tài) 的含 量隨西瓜果實(shí)發(fā)育而上升 ，在授粉后 達(dá)到 峰值 ，后期逐步下降 。含糖量高的栽培西瓜果實(shí)游離態(tài) 的含 量在果實(shí)發(fā)育的各個(gè)階段 ，均顯著高于含糖量低的野生西瓜 ，說(shuō)明果實(shí)游離態(tài) 的積 累可能與果實(shí)成熟及含糖量積累相關(guān) 。已有研究表明生長(zhǎng)素酰胺水解酶 （ ， ，）通過(guò)催化結(jié)合態(tài)生長(zhǎng)素釋放游離態(tài) 生長(zhǎng)素 ，是游離態(tài)生長(zhǎng)素積累的限速酶 。在西瓜全基因組上對(duì)基 因家族進(jìn)行了系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析，通 過(guò)檢測(cè)了西瓜各個(gè)組織的表達(dá)情況 ，發(fā)現(xiàn)西瓜果肉中只有 個(gè) 基因 表達(dá) ，并且栽培西瓜果肉中這 個(gè)基因的表達(dá)量均顯著高于野生西瓜 ，其中 ，在栽培西瓜果肉中的表達(dá)量最高 ，且 與果實(shí)游離態(tài) 的含 量變化趨勢(shì)正相關(guān) ，推測(cè)該基因?qū)υ耘辔鞴嫌坞x態(tài)的積累起關(guān)鍵作用，進(jìn)而調(diào)控了西瓜果實(shí)的發(fā)育與成熟的進(jìn)化 。關(guān) 鍵 詞 ：生長(zhǎng)素 ；西瓜 ；游離 ；生長(zhǎng)素酰胺水解酶收 稿 日期 ：基金 項(xiàng)目 ：北京學(xué)者資助項(xiàng)目 （）；國(guó)家 西甜瓜產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系資助項(xiàng)目 （）；北京西甜瓜創(chuàng)新團(tuán) 隊(duì)資助項(xiàng)目 （）。第一 作者簡(jiǎn)介 ：高嬙 （），女 ，在讀 碩士 ，從事蔬菜育種與生物技術(shù)研究 。：。通訊 作者 ：許勇 （），男 ，博士 ，研 究員 ，從事蔬菜育種研究 。：。肉質(zhì)果實(shí)的 發(fā)育與成熟是復(fù)雜而高度協(xié)調(diào)的過(guò)程 ，依賴于多個(gè)植物生長(zhǎng)激素的協(xié)調(diào)作用，其中生長(zhǎng)素在果 實(shí)發(fā)育的過(guò)程中起到了不可替代的作用 。生長(zhǎng)素不僅對(duì)果實(shí)坐果起重要作用，還能通 過(guò)調(diào)控細(xì)胞分裂和細(xì)胞擴(kuò)增 ，決定果實(shí)最終大小。在一 些水果作物中 ，生長(zhǎng)素含量的下降被認(rèn)為是果實(shí)啟動(dòng)成熟的先決條件。外施 生長(zhǎng)素可以干擾許多作物的果實(shí)成熟過(guò)程。植物 生長(zhǎng)素的主要天然活性形式是吲哚乙酸 （ ，），通過(guò)植物自身的色氨酸 依賴途徑及色氨酸非依賴途徑合成。合成有 活性的游離態(tài)可以 通過(guò)酯鍵與糖結(jié)合 ，或通過(guò)酰胺鍵與氨基酸或肽結(jié)合 ，成為非活性的結(jié)合態(tài)，植物 體的生 長(zhǎng)素以結(jié)合態(tài)形式存在。以結(jié) 合態(tài)形式存儲(chǔ) 、運(yùn)輸 ，其后在生長(zhǎng)素 酰 胺 水 解 酶 （ ， ，）作 用 下 水解產(chǎn)生游離態(tài)，在不 同發(fā)育過(guò)程中提供具有生物活性的生長(zhǎng)素。擬南 芥的蛋白 家族有個(gè)成員 ，其中的主 要底物是，參與 調(diào)控了擬南芥對(duì)干旱脅迫的響應(yīng)。、及基因 ，通 過(guò)調(diào)控游離態(tài)的含 量進(jìn)而參與調(diào)節(jié)了光照條件下下胚軸的延伸及側(cè)根的發(fā)生 、根毛的延伸。蕪菁受到根腫菌侵 染 ，肉質(zhì) 根 中 的含 量 增 加 可 能 與和的 表 達(dá) 量 變 化 相 關(guān)；和調(diào)控 了 蒺 藜 苜 蓿 根 部 受 真 菌 侵 染 時(shí)含量 的增加。桃家族 的基因在 桃果實(shí)成熟過(guò)程表達(dá)量上調(diào)了倍 ，可能通過(guò)催化生長(zhǎng)素氨基酸結(jié)合態(tài)水解的形式參與了溶質(zhì)型桃果實(shí)成熟階段的生長(zhǎng)素的躍變過(guò)程 ，進(jìn)而調(diào)控桃果實(shí)發(fā)育過(guò)程。因此 ，蛋白 通過(guò)調(diào)控游離態(tài)的釋放調(diào)控了植 物的眾多發(fā)育過(guò)程 。果實(shí)發(fā)育與成熟過(guò)程與游離態(tài)的含 量息息相關(guān) 。西瓜作為非呼吸躍變型果實(shí)發(fā)育研究的理想模式作物 ，生長(zhǎng)素對(duì)其果實(shí)發(fā)育與成熟過(guò)黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué) 期程的 研究尚在起步階段 ，生長(zhǎng)素在西瓜果實(shí)發(fā)育過(guò)程的含量變化尚未有研究報(bào)道 ，關(guān)于生長(zhǎng)素酰胺水解酶對(duì)此過(guò)程的調(diào)控作用尚不清楚 。本研究首次報(bào)道了含糖量低的野生型西瓜與含糖量高的栽培型西瓜果實(shí)發(fā)育過(guò)程中的生長(zhǎng)素含量變化差異 ；利用生物信息學(xué)分析方法 ，鑒定并分析西瓜全基因 組家 族 成 員 的 基 本 特 征 ：通 過(guò)檢測(cè) 了西瓜基因 在野生型及栽培型西瓜果實(shí)發(fā)育過(guò)程的表達(dá)差異 ，為基因 家族成員的功能解析奠定了基礎(chǔ) 。 材 料 與方法 材料以 野 生 型 種 質(zhì) “”（）與早熟栽培西瓜 自交系（ ）為供 試材料 。野生材料由課題組從美國(guó)引進(jìn)并保存 ，授粉后約種子成 熟 ，但果實(shí)可溶性糖含量極低 ，無(wú)甜味 ，瓤色白且硬 ；早熟栽培種西瓜由本課題組選育并保存 ，授粉后約成熟 ，成熟果實(shí)含糖量 高 ，中心瓤甜 ，可溶性固形物左右 ，瓤 色紅 ，肉質(zhì)脆酥 。早熟栽培西瓜果實(shí)發(fā)育過(guò)程有個(gè)關(guān)鍵期 ：未成熟 白 瓤 期 （授 粉 后，）；白 粉 瓤期 （）；紅 瓤 期 （ ）；過(guò) 熟期 （）。以此 作為取樣時(shí)間點(diǎn) 。 方法 果實(shí)整組織游離態(tài)含量 的測(cè)定游離態(tài)的含 量測(cè)定在中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)院質(zhì)譜 （）實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行 。分別采集 “”、授粉 后、及的西瓜 果實(shí)各部位樣品 。采集的樣品在液氮中冷凍后 ，儲(chǔ)存在冰箱 。測(cè) 定時(shí)將樣品粉碎成細(xì)粉 ，取樣 品 置 于離 心 管 ，加 入提取 液 （異丙醇水鹽酸，）和內(nèi)標(biāo) （·）溶液 ，渦 旋振蕩，在、·條件 下振蕩，加入萃取 液 （氯仿溶液 ），渦旋振蕩，在、·條件 下振蕩，相同 溫度下 ·離心，兩相 形成 ，轉(zhuǎn)移下層液體，室溫下氮?dú)獯蹈?，用甲醇 溶液復(fù)溶 ， ·離心后 ，取上 清液裝入進(jìn)樣小瓶 ，上機(jī)待測(cè) 。所用液相色譜儀為 （ ， ，），使用 色譜柱 （×，!；， ，）進(jìn)行 色譜分離 ，采用以下溶劑梯度分離（相 ：水含乙酸 ；相 ：乙 腈含乙酸 ）：，； ，； ，；，；，；，；流速 為·，上樣 量為。使用高分辨質(zhì)譜儀 （ ，）進(jìn)行 質(zhì)譜分析 ，參數(shù)設(shè)置如下 ： ：，（）：，：， ：，：， ：， ：， ：，保留 時(shí)間和的質(zhì) 譜信息取決于標(biāo)準(zhǔn)品 。每個(gè)樣本重復(fù)次 。 可溶 性固形物含量的測(cè)定用手持式糖度 計(jì) （，）測(cè)定 西瓜果實(shí)中心果肉組織的可溶性固形物含量 。 西瓜家族 基因序列檢索利用擬南芥基因組數(shù)據(jù)庫(kù)獲得基因 的編碼序列 ，通過(guò)檢索 葫 蘆 科 基 因 組 數(shù) 據(jù) 庫(kù) （：）對(duì)西 瓜蛋白組序列進(jìn)行比對(duì) ，選取閾值小于序列 ，根 據(jù)基因注釋去除非基因后 ，以 此序列集合在西瓜蛋白組序列內(nèi)再次做比對(duì) 檢索 （），在匹 配序列中篩除非序列 后列為西 瓜候 選 基 因序列 。 西瓜蛋白 家族進(jìn)化與結(jié)構(gòu)分析從擬南芥基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中獲得擬南芥蛋白 家族 序 列 （，；，；，；，；，；，；，），并從 檢索獲得的轉(zhuǎn)錄本序列翻譯出西瓜蛋白 家族序列 ，用 進(jìn)行 序列比對(duì) （），使用 軟件 構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù) ，做次，其它 參數(shù)為系統(tǒng)默認(rèn)值 。 西瓜基因在 不同組織部位的表達(dá)分析提取 試劑盒購(gòu)自華越洋生物公司 ；反轉(zhuǎn)錄試劑盒為 ，由提供 ；熒 光定量試劑 盒購(gòu)自公司 ；引物由北京天一輝遠(yuǎn) 生物科技有限公司合成 。用提取 試劑盒分別提取 ，分別取根 、頂端 生長(zhǎng)點(diǎn) 、葉片組織 ，和授粉后、的果 肉組織總。使用 （）對(duì)各期 高 嬙等：生長(zhǎng)素酰胺水解酶基因在西瓜果實(shí)發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)樣品進(jìn)行 純化 。以純化后的樣品 為模板 ，利用試劑盒 （）進(jìn)行 反轉(zhuǎn)錄 ，獲得。反轉(zhuǎn) 錄得到的稀釋倍 ，用作 反應(yīng)模板 。以西瓜基因 作為內(nèi)參 ，利用型熒 光定量?jī)x （）對(duì)基 因 （引物見(jiàn)表）進(jìn)行定量分析 。采 用比較法計(jì) 算各基因的相對(duì)表達(dá)量 。表 熒光定量擴(kuò)增的引物序列 基 因 登錄號(hào) 上 游 引物 下 游 引物 （） 數(shù)據(jù) 分析采用 軟件 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析 。 結(jié) 果 與分析 野生西瓜與栽培 西瓜果實(shí)整組織游離態(tài)的含 量變化檢測(cè) “”、兩個(gè)品種西瓜果實(shí)不 同發(fā)育時(shí)期整組織游離態(tài)的含 量變化 ，結(jié)果顯示 ，二者游離態(tài)的含 量均呈現(xiàn)先升后降趨勢(shì) ，達(dá)到 最高值 ，而后下降 。在果實(shí)發(fā)育后期 ，野生西瓜游離態(tài)的含量幾乎降為零 ，而栽 培品種仍維持較高含量的游離態(tài)。栽培 西瓜在授粉后的果實(shí)發(fā)育的各個(gè)階段游離態(tài)的含量顯著高于野生西瓜 （圖）。栽培 品種可溶 性固形物含量在白粉瓤期（）以后 迅速積累 ，一直增加 ，只在過(guò)熟期略有降低 ，而野生品種可溶性固形物含量一 直很低 （圖），不難推測(cè)出 ，栽培西瓜后期較高含量的游離態(tài)可能 對(duì)其可溶性固形物的積累起重要的作用 。潘磊等在桃果實(shí)發(fā)育中也發(fā) 現(xiàn)同樣現(xiàn)象 。 西瓜 生長(zhǎng)素酰胺水解酶基因家族的全基因組鑒定與進(jìn)化樹(shù)分析前人的研究結(jié)果表明 ，以結(jié) 合態(tài)形式存儲(chǔ) 、運(yùn)輸 ，生長(zhǎng)素酰胺水解酶 （ ， ，）可以 將其水解產(chǎn)生游離態(tài)，是游 離態(tài)積累 的限速酶 ，因此西瓜果實(shí)游離態(tài)積累可 能與基因 有關(guān) ，有必要進(jìn)一步在西瓜全基因組上鑒定分析基因 家族成員 。目前在以擬南芥上已鑒定出個(gè)基因 （，；，；，；，；，；，；，），通過(guò) 其編碼區(qū)在西瓜基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn) 行 比 對(duì) ，在西瓜中共得到個(gè)基因 （表）。不 同 小寫(xiě) 字 母 表 示 在 水 平 差 異 顯 著 性 （）。下同 。 圖 不同類(lèi)型西瓜果實(shí)中游離態(tài) 含量 的變化 圖 不同類(lèi)型西瓜果實(shí)中可溶性固形物含量的變化 黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué) 期表 西瓜 基因組中基因 家族的特征 基 因 登錄號(hào) 染色 體定位預(yù)測(cè) 的蛋白 氨 基 酸長(zhǎng)度 分子 量 結(jié)構(gòu) 域 二聚 化結(jié)構(gòu)域 表示存在此結(jié)構(gòu)域 。 利用 進(jìn)化樹(shù)分析軟件對(duì)西 瓜的個(gè)和 擬 南 芥 的個(gè)蛋 白 序 列 （，；，；，；，；，；，；，）進(jìn)行 進(jìn)化分析 。由圖可以看出 ，西瓜和擬南芥的蛋白 主要分為大類(lèi) ，西瓜中 的、基 因 編 碼 的 蛋 白 和 擬 南 芥（）、（）、（）、（）和（）蛋白 聚為一類(lèi) ，、編碼 的蛋白與（）和（）聚 為 一 類(lèi) 。其 中 ，與（）親緣 關(guān)系較近 ，可能具有相似功能 。圖 西 瓜 和擬南芥 蛋白家族的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析 西瓜基因 在不同組織部位的表達(dá)分析分別提取授粉 后的根 、葉 、頂 端生長(zhǎng)點(diǎn) 、果柄及果肉組織 ，利用熒光定量對(duì)候選個(gè)基因 的表達(dá)情況進(jìn)行分析 。以時(shí)在果柄組織的表達(dá) 量作為，從圖中可以看出 ，和在根 部的表達(dá)量最高 ，排在第位的是它的 表達(dá) 量 約 為的，、和表達(dá) 量較低 。與其它器官相比 ，西瓜基因 家族在葉片中的表達(dá)量均相 對(duì) 較 低 。在 頂 端 生 長(zhǎng) 點(diǎn) 中 ，主 要 表 達(dá)、基因 ，其 它基因 表達(dá)量 較 低 。果柄組織中主要表達(dá)、基 因 ，其 次 為、基因 ，與表達(dá) 量極低 。在果肉組織中 ，和表達(dá) 量極低 ，幾乎為。表達(dá) 量最高 ，高出排在第二 位 的將 近 一 倍 ，和表達(dá) 量約為的。圖 中 基因在西瓜不同組織的表達(dá)情況 期 高 嬙等：生長(zhǎng)素酰胺水解酶基因在西瓜果實(shí)發(fā)育過(guò)程中的表達(dá) 基因 在野生及栽培西瓜果實(shí)發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)差異分析分別提取授粉 后、和授粉 后、的果肉 組織總，對(duì)比 檢測(cè)個(gè)基因 在野生與栽培西瓜品種果肉中表達(dá)差異情況 ，取相同時(shí)期果 皮 作 對(duì) 照 。以 授 粉 后時(shí)在果 皮組織的表達(dá)量作為。從圖中可以看出 ，除基因 以外 ，其余個(gè)基因 在果肉中的表達(dá)均顯著高于在果肉 及果皮 的表達(dá) ，并且在野生果肉與果皮 的表達(dá)情況基本相同 。其中 ，、在果肉 表達(dá)量變化趨勢(shì)與果實(shí)整組織游離態(tài)的濃 度變化趨勢(shì)類(lèi)似 ，都在授粉后達(dá)到最高 ，在授粉后降低 ，又 在有所 上調(diào) 。這個(gè)基因均表現(xiàn)出在含糖量高的組織表達(dá)量高 ，栽培西瓜的果瓤高于野生西瓜的果瓤 ，栽培西瓜的果皮 （含糖量也低 ）與野生西瓜的果瓤同樣表現(xiàn)出較低的表達(dá)量 。其中表達(dá) 量最大 ，推測(cè)其在水解結(jié)合態(tài)生長(zhǎng)素中發(fā)揮更大的作用 。圖 基因在不同類(lèi)型西瓜果實(shí)中的表達(dá)情況 結(jié) 論 與討論生長(zhǎng) 素很早就被報(bào)道參與果實(shí)發(fā)育過(guò)程 ，外施生長(zhǎng)素會(huì)擾亂正常的果實(shí)成熟過(guò)程，此外 生長(zhǎng)素對(duì)果實(shí)坐果及果實(shí)大小的調(diào)控也起到關(guān)鍵作用。除此 以外 ，在一些報(bào)道中 ，提出了果實(shí)組織中生長(zhǎng)素合成或信號(hào)傳導(dǎo)與糖積累之間的聯(lián)系，但生 長(zhǎng)素如何影響糖代謝進(jìn)而影響果實(shí)品質(zhì)的機(jī)理還不清楚 。在煙草細(xì)胞中 ，生長(zhǎng)素抑制了淀粉粒的發(fā)育 ，淀粉生物合成主要酶的積累受生 長(zhǎng) 素 的 影 響。下調(diào)生長(zhǎng)素響應(yīng)因子的表 達(dá)的轉(zhuǎn)基因番茄 ，在果實(shí)發(fā)育早期積累更多的淀粉 ，后期積累更多的糖。西瓜 起 源 于 非 洲 ，西 瓜 祖 先 品 種 （或 ，或其 它 ）有著白而堅(jiān)硬的果肉 、厚厚的果皮 、極低的含糖量 ，味苦 ，以上性狀均有利于在雨季到來(lái)之前保護(hù)種子 ，防止種子過(guò)早被傳播。經(jīng)過(guò) 人為馴化過(guò)程 ，現(xiàn)代栽培西瓜和野生西瓜祖先品種在外觀和成分上有著明顯的不同 ，這些變化的結(jié)果就是由不成熟并苦澀的野生西瓜變成了完全成熟并甜的栽培西瓜 。目前西瓜馴化過(guò)程的關(guān)鍵影響因素的研究還很少 ，西瓜由不甜的野生品種馴化為可以積累糖分的栽培品種 ，涉及的關(guān)鍵因子有待于進(jìn)一步研究 。本研究測(cè)量了野生品種 “”、早熟栽 培西瓜品種果實(shí) 不同發(fā)育時(shí)期整組織的游離態(tài)濃度 的變化情況 ，發(fā)現(xiàn)不同類(lèi)型西瓜果實(shí)游離態(tài)的濃 度變化有差異 。二者游離態(tài)的含 量均呈現(xiàn)先升后降趨勢(shì) ，達(dá)到黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué) 期最高 值 ，而后下降 。這可能與種子發(fā)育有關(guān) ，種子早期形成與發(fā)育會(huì)合成大量游離態(tài)，成熟后 ，游 離態(tài)的含 量迅速降低，導(dǎo)致 果實(shí)整組織游離態(tài)的降 低 。在果實(shí)發(fā)育中后期 ，果實(shí)整組織的游離態(tài)主要 來(lái)源于果肉 ，野生西瓜游離態(tài)的含 量幾乎降為零 ，而栽培品種仍維持較高含量的游離態(tài)。此時(shí)是栽培西瓜果肉 中可溶性固形物迅速積累期 （決定西瓜含糖量 ），游離態(tài)可能 是栽培西瓜果肉糖分積累的關(guān)鍵因素 ?？傮w上看 ，栽培西瓜在果實(shí)發(fā)育的各個(gè)階段游離態(tài)的含 量顯著高于野生西瓜 ，這與栽培西瓜同化物積累的能力顯著高于野生型相吻合 。作為 重要的植物激素 ，其含量的變化對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育有重要的影響 。除了從頭合成途徑 ，從結(jié)合態(tài)水解 釋放出有活性的也是其 重要來(lái)源 ，生長(zhǎng)素酰胺水解酶基因 在此過(guò)程發(fā)揮了重要的作用。最早在擬南芥發(fā)現(xiàn)并 鑒定了生長(zhǎng)素酰胺水解酶基因，后在許 多植物中陸續(xù)發(fā)現(xiàn)蛋白 通過(guò)調(diào)控游離態(tài)的釋 放調(diào)控了植物的眾多發(fā)育過(guò)程 。其中 ，桃家族 的基因在 桃果實(shí)成熟過(guò)程表達(dá)量上調(diào)了倍 ，可能通過(guò)催化生長(zhǎng)素氨基酸結(jié)合態(tài)水解的形式參與了溶質(zhì)型桃果實(shí)成熟階段生長(zhǎng)素 的 躍 變 過(guò) 程 ，進(jìn)而調(diào)控桃果實(shí)發(fā)育過(guò)程。目前基因 家族的 功 能 研 究 還 十 分有限 。本研究從西瓜基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中鑒定出個(gè)家 族 成 員 ，編 碼 的 氨 基 酸 長(zhǎng) 度 在。結(jié)果 顯示 ，西瓜家族 基因中、及在栽 培西瓜果肉中的表達(dá)量 ，明顯高于野生西瓜果肉 ，且在整個(gè)果實(shí)發(fā)育時(shí)期保持相對(duì)較高水平 ，這與栽培西瓜果實(shí)整組織游離態(tài)的含量較高相一致 。其 中 ，分析發(fā)現(xiàn)基因 的表達(dá)量變化趨勢(shì)與果實(shí)整組織游離態(tài)的濃 度變化趨勢(shì)一致 ，推測(cè)該基因是調(diào)控西瓜果實(shí)生長(zhǎng)素含量的關(guān)鍵基因 。進(jìn)化樹(shù)結(jié)果顯示 ，編碼 的蛋白與擬南芥親緣 關(guān)系較近 。主要 水解和，推測(cè)主要以和為底 物 ，調(diào)節(jié)西瓜果實(shí)游離態(tài)的含 量 ，進(jìn)而參與栽培西瓜可溶性固形物的積累 。進(jìn)一步對(duì)果實(shí)差異表達(dá)的家族 基因的功能開(kāi)展解析 ，將會(huì)探明生長(zhǎng)素調(diào)控西瓜果實(shí)成熟及糖分積累的分子機(jī)制 ，本項(xiàng)研究為此奠定了良好工作基礎(chǔ) 。參考文獻(xiàn) ： ， ， ，（）： ， ， ，（）： ， ， ， （ ） ，（）： ， ， ， ，（）： ，（）： ， ， ，（）： ， ， ，（）： ，（）： ， ：， ，（）： ， ， ， ， ， ，（）： ， ， ， ，（）： ， ， ， ，（）： ， ， ， ，（）： ， ü ： ，（）： ， ， ， 期 高 嬙等：生長(zhǎng)素酰胺水解酶基因在西瓜果實(shí)發(fā)育過(guò)程中的表達(dá) ，（）： ， ， ， ，（）：潘磊 ，曾 文芳 ，牛良 ，等 桃生長(zhǎng)素酰胺水解酶基因家族序列特征及其表達(dá)分析 園 藝 學(xué) 報(bào) ，（）： ， ， ， ： ，（）： ， ， ， ，（）： ， ， ， ，（）： ， ， ， ， ，： ， ： ，（）： ， ， ， ，