NY_T 4492-2025 番茄品種鑒定SSR分子標(biāo)記法.pdf

2025 01 09 發(fā)布 2025 05 01 實(shí)施 番茄品種鑒定 SSR分子標(biāo)記法 05 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 備案號(hào) XXXX XXXX 65 020 01 CCS B 4492 2025 Identification of tomato Solanum Lycopersicum L varieties SSR marker method 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部 發(fā)布 NY T 目 次 前言 范圍 規(guī)范性引用文件 術(shù)語和定義 縮略語 原理 主要儀器設(shè)備及試劑 溶液配制 引物相關(guān)信息 參照品種 操作程序 結(jié)果統(tǒng)計(jì) 結(jié)果判定 附錄A 規(guī)范性 主要儀器設(shè)備及試劑 附錄B 規(guī)范性 溶液配制 附錄C 規(guī)范性 引物名單及序列 附錄D 資料性 引物相關(guān)信息 附錄E 資料性 參照品種相關(guān)信息 NY T 前 言 本文件按照G B T 標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第 部分 標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則 的規(guī)定起 草 請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利 本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任 本文件由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部種業(yè)管理司提出 本文件由全國(guó)植物新品種測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì) S A C T C 歸口 本文件起草單位 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部科技發(fā)展中心 北京通州國(guó)際種業(yè)科技有限公司 北京市農(nóng)林科學(xué)院蔬 菜研究所 本文件主要起草人 韓瑞璽 王均帥 馬瑩雪 靳鳳 張建 鄧超 王晨宇 霍秀愛 溫常龍 馮艷芳 李嬡 嬡 王銘堂 李常保 唐浩 陳紅 張秀杰 NY T 番茄品種鑒定 SSR分子標(biāo)記法 范圍 本文件規(guī)定了利用簡(jiǎn)單重復(fù)序列 S S R 標(biāo)記進(jìn)行番茄 SolanumLycopersicumL 品種鑒定的操作 程序 結(jié)果統(tǒng)計(jì)與結(jié)果判定 本文件適用于番茄品種S S R指紋數(shù)據(jù)采集 數(shù)據(jù)庫構(gòu)建和品種鑒定 規(guī)范性引用文件 下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款 其中 注日期的引用文件 僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件 不注日期的引用文件 其最新版本 包括所有的修改單 適用于本文 件 G B T 農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程 扦樣 G B T 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 N Y T 植物品種鑒定D N A分子標(biāo)記法 總則 術(shù)語和定義 N Y T 規(guī)定的術(shù)語和定義適用于本文件 縮略語 下列縮略語適用于本文件 A P S 過硫酸銨 a m m o n i u m p e r s u l p h a t e b p 堿基對(duì) b a s e p a i r C T A B 十六烷基三甲基溴化銨 c e t y l t r i m e t h y l a m m o n i u m b r o m i d e D N A 脫氧核糖核酸 d e o x y r i b o n u c l e i c a c i d d N T P s 脫氧核糖核苷三磷酸 d e o x y r i b o n u c l e o s i d e t r i p h o s p h a t e E D T A 乙二胺四乙酸 e t h y l e n e d i a m i n e t e t r a a c e t i c a c i d P A G E 聚丙烯酰胺凝膠電泳 p o l y a c r y l a m i d e g e l e l e c t r o p h o r e s i s P C R 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n S S R 簡(jiǎn)單重復(fù)序列 s i m p l e s e q u e n c e r e p e a t Taq酶 耐熱D N A聚合酶 Taq D N A p o l y m e r a s e T r i s 三羥甲基氨基甲烷 T r i s h y d r o x y m e t h y l m e t h y l a m i n o m e t h a n e T H A M T E 三羥甲基氨基甲烷乙二胺四乙酸 T r i s E D T A T B E 三羥甲基氨基甲烷硼酸鹽乙二胺四乙酸 T r i s b o r a t e E D T A T E M E D 四甲基乙二胺 N N N N t e t r a m e t h y l e t h y l e n e d i a m i n e 原理 不同番茄品種基因組中S S R的重復(fù)次數(shù)存在差異 這種差異可通過P C R擴(kuò)增及電泳方法進(jìn)行檢測(cè) 進(jìn)而區(qū)分不同的番茄品種 主要儀器設(shè)備及試劑 主要儀器設(shè)備及試劑見附錄A NY T 溶液配制 溶液配制方法見附錄B 引物相關(guān)信息 引物名單及序列見附錄C 引物相關(guān)信息見附錄D 參照品種 參照品種相關(guān)信息見附錄E 操作程序 樣品準(zhǔn)備 送檢樣品可為種子 幼苗 葉片等組織或器官 樣品需扦樣時(shí) 應(yīng)符合G B T 的要求 每份樣 品取不少于 個(gè)個(gè)體的葉片或其他等效物 混合分析 必要時(shí)進(jìn)行個(gè)體檢測(cè) DNA提取 取幼苗或葉片 m g m g 置于 m L離心管 加液氮充分研磨 每管加入 L經(jīng) 預(yù) 熱的C T A B提取液 充分混合 水浴 m i n m i n 其間多次輕緩顛倒混勻 每管加入與C T A B 提取液等體積的三氯甲烷和異戊醇混合液 輕緩混勻后靜置 m i n r m i n離心 m i n 吸取上清 液轉(zhuǎn)移至新的離心管中 加入等體積預(yù)冷的異丙醇 輕輕顛倒混勻 放置 m i n r m i n離 心 m i n 棄上清液 用體積分?jǐn)?shù)為 的乙醇溶液洗滌 遍 晾干 加入 L雙蒸水或T E緩沖液 充分溶解 檢測(cè)D N A濃度后 備用 注 以上為推薦的D N A提取方法 D N A質(zhì)量能夠滿足P C R擴(kuò)增要求的其他D N A提取方法均適用 D N A溶液的紫 外吸光度O D 與O D 的比值宜介于 注 三氯甲烷和異戊醇混合液中三氯甲烷與異戊醇的體積比為 PCR擴(kuò)增 反應(yīng)體系 P C R擴(kuò)增反應(yīng)體系的總體積和各組分的終濃度參照表 配制 可以依據(jù)試驗(yàn)條件調(diào)整 表 中的緩 沖液若含有氯化鎂 M g C l 不再加M g C l 溶液 加等體積雙蒸水替代 利用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 P A G E 檢測(cè)時(shí)選擇普通引物 利用熒光毛細(xì)管電泳檢測(cè)時(shí)選擇熒光標(biāo)記引物 熒光標(biāo)記位于上游引物 端 推薦的熒光標(biāo)記見附錄D 表 PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系 反應(yīng)組分原濃度終濃度推薦反應(yīng)體積 L 緩沖液 含M g C l d N T P s m m o l L m m o l L Taq酶 U L U L 上游引物 m o l L mm o l L 下游引物 m o l L mm o l L D N A n g L n g L 雙蒸水 總體積 反應(yīng)程序 推薦反應(yīng)程序?yàn)?預(yù)變性 m i n 變性 s 退火 s 延伸 s 共 個(gè)循環(huán) NY T 延伸 m i n 產(chǎn)物 保存 反應(yīng)程序中各反應(yīng)參數(shù)可根據(jù)P C R擴(kuò)增儀型號(hào) 酶 引物等不同而做適當(dāng)?shù)?調(diào)整 PCR產(chǎn)物檢測(cè) 變性PAGE 制膠 用洗滌劑將玻璃板清洗干凈 再用雙蒸水 無水乙醇分別擦洗 遍 玻璃板干燥后 將 m L親和 硅烷工作液均勻涂在長(zhǎng)玻璃板上 將 m L剝離硅烷工作液均勻涂在帶凹槽的短玻璃板上 操作過程 中防止 塊玻璃板互相污染 玻璃板徹底干燥后 將 m m厚的塑料隔條整齊放在長(zhǎng)玻璃板兩側(cè) 蓋上 凹槽短玻璃板 用夾子固定 用水平儀檢查玻璃膠室是否水平 取 m L質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 的P A G E膠溶 液 加入 L四甲基乙二胺 T E M E D 和 L質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 的過硫酸銨 A P S 迅速混勻 將膠灌 入玻璃膠室 灌膠過程中防止出現(xiàn)氣泡 待膠室灌滿后 在凹槽處將 m m厚鯊魚齒梳子平齊端向里輕 輕插入膠液約 m m 室溫聚合 h以上 膠聚合后 清理膠板表面溢出的膠液 輕輕拔出梳子 用水清洗 干凈備用 注 為保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性 建議玻璃板的規(guī)格為 c m c m 變性 在 L P C R產(chǎn)物中加入 L 加樣緩沖液 混勻 在P C R儀上運(yùn)行 變性 m i n 取出立即 置于冰上 冷卻 m i n以上備用 電泳 將膠板安裝于電泳槽上 在電泳正極槽 下槽 加入 m L的 T B E緩沖液 負(fù)極槽 上槽 加入 m L經(jīng) 預(yù)熱的 T B E緩沖液 使其超過凝膠頂部約 c m V恒壓預(yù)電泳 m i n m i n 用移液器吹吸加樣槽 清除氣泡和雜質(zhì) 將樣品梳 鯊魚齒朝下 插入凝膠 m m m m 每一個(gè)加樣孔 點(diǎn)入 L L樣品 除送檢樣品外 還應(yīng)同時(shí)加入?yún)⒄掌贩N擴(kuò)增產(chǎn)物 V恒壓電泳 電泳時(shí)間參 考二甲苯青指示帶移動(dòng)的位置和擴(kuò)增產(chǎn)物預(yù)期片段大小范圍 見附錄D 加以確定 二甲苯青指示帶在質(zhì) 量分?jǐn)?shù)為 P A G E膠電泳的移動(dòng)位置與 b p擴(kuò)增產(chǎn)物泳動(dòng)的位置大致相當(dāng) 擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小在 b p b p b p b p范圍的 電泳參考時(shí)間分別為 h h h h 電泳結(jié)束后關(guān)閉電源 取下玻璃板并輕輕撬開 通常凝膠附著在長(zhǎng)玻璃板上 染色 將附著凝膠的長(zhǎng)玻璃板膠面向上浸入固定液中 輕輕晃動(dòng) m i n后取出 在雙蒸水中快速漂洗 時(shí)間 不超過 s 將膠板放入染色液中 輕輕晃動(dòng) m i n后取出 在雙蒸水中快速漂洗 時(shí)間不超過 s 將膠 板放入顯影液中 輕搖晃動(dòng)待條帶清晰后取出 再迅速放入固定液中定影 m i n取出 在雙蒸水中漂洗 m i n 取出膠板 晾干 放在膠片觀察燈上觀察 記錄結(jié)果 拍照保存 注 固定液 染色液 雙蒸水和顯影液的用量 可依據(jù)膠板數(shù)量和大小調(diào)整 以淹沒膠面為準(zhǔn) 熒光毛細(xì)管電泳 P C R產(chǎn)物樣品準(zhǔn)備 按照預(yù)先確定的引物分組 分別取等體積的同一組中不同熒光引物的擴(kuò)增產(chǎn)物 混勻稀釋 從混合液 中吸取 L 加入D N A分析儀專用 孔板中 板中各孔分別加入 L分子量?jī)?nèi)標(biāo)和 L去離子 甲酰胺 在P C R儀上 變性 m i n 取出后立即置于冰上 冷卻 m i n以上 瞬時(shí)離心 s后備用 注 引物分組和稀釋倍數(shù)通過熒光毛細(xì)管電泳預(yù)實(shí)驗(yàn)確定 等位變異檢測(cè) 打開D N A分析儀 檢查儀器工作狀態(tài)和試劑狀態(tài) 將裝有樣品的 孔上樣板放置于樣品架基座 上 打開數(shù)據(jù)收集軟件 按照儀器使用手冊(cè) 編輯樣品表 執(zhí)行運(yùn)行程序 D N A分析儀將自動(dòng)運(yùn)行 并保存 電泳原始數(shù)據(jù) 數(shù)據(jù)分析 NY T 數(shù)據(jù)讀取 每個(gè)S S R位點(diǎn)的等位變異參照擴(kuò)增片段大小命名 見附錄D 對(duì)于變性P A G E 將送檢樣品在某一 位點(diǎn)擴(kuò)增片段的遷移位置與對(duì)應(yīng)的參照品種進(jìn)行比較 確定送檢樣品在該位點(diǎn)的等位變異 對(duì)于熒光毛 細(xì)管電泳 通過參照品種消除不同批次間或者不同型號(hào)D N A分析儀間可能存在的系統(tǒng)誤差 使用片段分 析軟件讀取送檢樣品在該位點(diǎn)的等位變異 純合位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)記為X X 雜合位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)記錄為X Y 其中X Y分別為該位點(diǎn) 上的 個(gè)等位變異 小片段數(shù)據(jù)在前 大片段數(shù)據(jù)在后 缺失位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)記錄為 示例 樣品在某個(gè)位點(diǎn)上僅出現(xiàn) 個(gè)等位變異 為 b p 則該位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)記錄為 示例 樣品在某個(gè)位點(diǎn)上有 個(gè)等位變異 分別為 b p b p 則該位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)記錄為 數(shù)據(jù)比對(duì) 將送檢樣品每個(gè)位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)逐一比對(duì) 按照位點(diǎn)相同 差異 數(shù)據(jù)缺失 無法判定等情形 記 錄每個(gè)位點(diǎn)的結(jié)果 結(jié)果統(tǒng)計(jì) 統(tǒng)計(jì)比對(duì)結(jié)果為位點(diǎn)差異的情況 計(jì)算差異位點(diǎn)數(shù) 結(jié)果判定 判定規(guī)則 當(dāng)品種間差異位點(diǎn)數(shù) 判定為 不同 當(dāng)品種間差異位點(diǎn)數(shù) 判定為 疑同 當(dāng)品種間差異位點(diǎn) 數(shù) 但存在位點(diǎn)數(shù)據(jù)缺失或無法判定情形時(shí) 不做判定 結(jié)果表述 送檢樣品與對(duì)照樣品 或數(shù)據(jù)庫中品種 采用檢測(cè)平 臺(tái) 檢測(cè)位點(diǎn)數(shù)為 差異位點(diǎn)數(shù)為 判定為 當(dāng)存在位點(diǎn)數(shù)據(jù)缺失或無 法判定情形時(shí) 應(yīng)表述具體情況 示例 送檢樣品A與對(duì)照樣品B采用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)平臺(tái) 檢測(cè)位點(diǎn)數(shù)為 差異位點(diǎn)數(shù)為 判定為 疑同 示例 送檢樣品A與對(duì)照樣品B采用熒光毛細(xì)管電泳檢測(cè)平臺(tái) 檢測(cè)位點(diǎn)數(shù)為 差異位點(diǎn)數(shù)為 送檢樣品在 S S R 位點(diǎn)數(shù)據(jù)缺失 NY T 附 錄 A 規(guī)范性 主要儀器設(shè)備及試劑 A 主要儀器設(shè)備 A P C R擴(kuò)增儀 A 高壓電泳儀 最高電壓不低于 V 具有恒電壓 恒電流和恒功率功能 A 垂直電泳槽及配套的制膠附件 A 離心機(jī) A 水平搖床 A 膠片觀察燈 A 電子天平 感量為 g和 g A 微量移液器 規(guī)格分別為 L L L L L 連續(xù)可調(diào) A 磁力攪拌器 A 核酸濃度測(cè)定儀或超微量紫外分光光度計(jì) A 微波爐 A 高壓滅菌鍋 A 酸度計(jì) A 水浴鍋 A 低溫冰箱 A 制冰機(jī) A 凝膠成像系統(tǒng)或紫外透射儀 A D N A分析儀 基于毛細(xì)管電泳 有片段分析功能和數(shù)據(jù)分析軟件 最低區(qū)分力 b p A 其他相關(guān)儀器和設(shè)備 A 主要試劑 除非另有說明 在分析中均使用分析純?cè)噭?A 十六烷基三甲基溴化銨 C T A B C H C H N B r C A S號(hào) A 三氯甲烷 C H C l C A S號(hào) A 異戊醇 C H O C A S號(hào) A 異丙醇 C H C H O H C A S號(hào) A 乙二胺四乙酸二鈉 E D T A N a C H N N a O C A S號(hào) A 三羥甲基氨基甲烷 T r i s C H N O C A S號(hào) A 濃鹽酸 H C l C A S號(hào) A 氫氧化鈉 N a O H C A S號(hào) A P C R緩沖液 含M g m m o l L A 種脫氧核糖核苷酸 d A T P d T T P d G T P d C T P A 氯化鈉 N a C l C A S號(hào) A TaqD N A聚合酶 Taq酶 C A S號(hào) NY T A D N A M a r k e r D N A片段分布范圍在 b p b p A 甲酰胺 C H N O C A S號(hào) A 溴酚藍(lán) C H B r O S C A S號(hào) A 二甲苯青 C H N N a O S C A S號(hào) A 甲叉雙丙烯酰胺 H C C H C O N H C H C A S號(hào) A 丙烯酰胺 C H N O C A S號(hào) A 硼酸 H B O C A S號(hào) A 尿素 C H N O C A S號(hào) A 親和硅烷 A 剝離硅烷 A 無水乙醇 C H O C A S號(hào) A 四甲基乙二胺 T E M E D C H N C A S號(hào) A 過硫酸銨 A P S N H S O C A S號(hào) A 冰醋酸 C H C O O H C A S號(hào) A 硝酸銀 A g N O C A S號(hào) A 甲醛 H C H O C A S號(hào) A D N A分析儀用丙烯酰胺膠液 A D N A分析儀用分子量?jī)?nèi)標(biāo) A D N A分析儀用電泳緩沖液 A D N A分析儀用光譜校準(zhǔn)基質(zhì) NY T 附 錄 B 規(guī)范性 溶液配制 試劑配制用水需符合G B T 的要求 B DNA提取溶液的配制 B mol LEDTA溶液 稱取 g N a E D T A H O 溶于 m L水中 充分?jǐn)嚢枞芙?加N a O H調(diào)p H至 加水定 容至 m L 高壓滅菌 m i n B mol LHCl溶液 量取 m L濃鹽酸 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 加水定容至 m L B mol LNaOH溶液 稱取 g N a O H 溶于 m L水中 充分?jǐn)嚢枞芙?加水定容至 m L B mol LTris HCl溶液 稱取 g T r i s堿 溶于 m L水中 充分?jǐn)嚢枞芙?加H C l調(diào)p H至 加水定容至 m L 高壓滅菌 m i n B CTAB提取液 稱取 g C T A B g N a C l置于 m L燒杯中 量取 m L m o l L T r i s H C l溶液和 m L m o l L E D T A溶液倒入燒杯中 加 m L水 充分?jǐn)嚢枞芙?加水定容至 m L 高壓滅菌 m i n B TE緩沖液 量取 m L m o l L T r i s H C l溶液和 m L m o l L E D T A溶液 加水定容至 m L 高壓 滅菌 m i n 保存 B PCR擴(kuò)增試劑的配制 B dNTP溶液 分別配制d A T P d T T P d C T P d G T P終濃度為 m m o l L的儲(chǔ)存液 各取 L混合 加 L T E緩沖液定容 配制成每種脫氧核糖核苷酸終濃度為 m m o l L的工作液 高壓滅菌 m i n 保存 B SSR引物溶液 開蓋前瞬時(shí)離心 s 按照說明書加T E緩沖液分別配制正向引物和反向引物終濃度為 m o l L 的儲(chǔ)存液 取 L儲(chǔ)存液 加 L T E緩沖液配制成終濃度 m o l L的工作液 B 變性PAGE試劑的配制 B 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 的丙烯酰胺溶液 稱取 g丙烯酰胺和 g甲叉雙丙烯酰胺 溶于 m L水中 充分?jǐn)嚢枞芙?加水定容至 m L 置于棕色瓶中 儲(chǔ)存 B 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 的變性PAGE膠溶液 稱取 g尿素置于 m L燒杯中 加入 m L T B E緩沖液和 m L質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 的丙烯酰胺溶液 定容至 m L NY T B 親和硅烷緩沖液 分別量取 m L無水乙醇和 L冰醋酸 加水定容至 m L B 親和硅烷工作液 分別量取 m L親和硅烷緩沖液和 L親和硅烷原液 混勻 B 剝離硅烷工作液 分別量取 m L二甲基二氯硅烷和 m L三氯甲烷 混勻 B 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 的APS溶液 稱取 g A P S 溶于 m L水中 混勻 于 保存 不超過 d B TBE緩沖液 稱取T r i s g 硼酸 g 溶于 m L水中 加入 m L E D T A溶液 m o l L p H 定 容至 m L B TBE緩沖液 量取 m L T B E緩沖液 加水定容至 m L 混勻 B 加樣緩沖液 分別稱取 g溴酚藍(lán)和 g二甲苯青 加入 m L去離子甲酰胺和 m L E D T A溶液 m o l L p H 攪拌溶解 B 銀染溶液的配制 B 固定液 量取 m L冰醋酸 加水定容至 m L B 染色液 稱取 g硝酸銀 加水定容至 m L B 顯影液 稱取 g氫氧化鈉 溶于 m L水中 用前加 m L甲醛 NY T 附 錄 C 規(guī)范性 引物名單及序列 引物名單及序列見表C 表C 引物名單及序列 引物編號(hào)引物名稱染色體上游引物序列 下游引物序列 P S S R C A C C C C C A C A C T T T T A T T T T C G T A A G G T A C C C C A A T A G A A A C G T T T T A A A P S O L S S R T C G T G G G A A T T T G T T A A C C C T C T T C A T C G T C C T C C T C C T G P S S R G C A A T T T C A G T T C T T C A A A G G C A A G C C T C C A G A A A T A C C A T T G T T C C A T G P S O L S S R C G C C T A T C G A T A C C A C C A C T A T T G A T C C G T T T G G T T C T G C P S O L S S R T T C T T C C C T T C C A T C A G T T C T T T T G C T G C T A T A C T G C T G A C A P S O L S S R A G G G C A A C A A A T C C C T C T T T G G A G A C G A G G C T G C T T A C A C P S S R A A A C T T A G G C A C C T T C T C C A A A T T G T G G T T T G A T A T T G T T G T T G T T G G C A P S O L S S R G C A C T A A G T G T T T A T T A A G C T C A T G C A T A C A T A T C A C T T T C C T C A T A C T T T G P S O L S S R A C A T G A G C C C A A T G A A C C T C A A C C A T T C C G C A C G T A C A T A P S S R T T G A T A A C A C A T G T C A C A T G A T T G G C T T G A T G A T G T A C T T G T G A T T G C G A P S O L S S R T G T G A A T A C A A T T T G C A C C C G G G T T A C T A A T G C A C A A G C G A P S O L S S R T G T G T T G C G T C A T T A C C A C T A A A C C C C A A C C A C C A A T A C T T T C C P S S R A A T T T C C C C A A T C A A A T A A T C T T C A A T T T G G C A G C T T A C G A C T G G A T A A T C T A A P S O L S S R G T T A G T G G C T T A C G T A T C G T A A T C G G T T A C A A C T T A C A A G A G C T G C A G P S O L S S R G C T A A C T T G A A A T A T T G C G T G T G A T G C G G T G G A A T A A G T G G T A G A G C P S S R T T T C G C C A A C T C T A T G A G C T A A A T C T T C T C A C T C A T T T T G T T A G T G A C A A P S O L S S R G A G C G A G C A G A A A G G T G A A T G A G C C T G A A A A C A T A G A A G T P S O L S S R G T T C C C G C T T G A G A A A C A A C C C A A T G C T G G G A C A G A A G A T P S O L S S R G A G T A T G G C A T C A T C A T A G C A C C C G A T T A A T T T T A T A A C C A A A T T G P S S R T G A A A A T A T C T T T A A A G T T C G T G T G C A C C T G C C C C A G G T G A T T C A P S S R A A A G A G A C T T A C T T G G A A A C A G C A G T G G A A T T G A A G A C A A G T T T T A G C C C P S O L S S R G A G G A C G A C A A C A A C A A C G A G A C A T G C C A C T T A G A T C C A C A A P S O L S S R G G T C T T T A A C A A G T T G T T G T A T G C T C A A G C A A A T T G C A A G G T T G G P S O L S S R A C T G C A T T T C A G G T A C A T A C T C T C A T A A A C T C G T A G A C C A T A C C C T C NY T 附 錄 D 資料性 引物相關(guān)信息 引物相關(guān)信息見表D 表D 引物相關(guān)信息 引物編號(hào)引物名稱熒光標(biāo)記等位變異范圍 b p主要等位變異 b p參照品種 P S S R T A M R A 飛天 壽研黃櫻 蘇粉 號(hào) 浙雜 P S O L S S R F A M 金陵佳玉 蘇粉 號(hào) P S S R F A M 飛天 壽研黃櫻 P S O L S S R H E X 壽研橙櫻 冠群五號(hào) P S O L S S R T A M R A 浙雜 飛天 金陵佳玉 P S O L S S R R O X 皖紅 杭雜 飛天 壽研黃櫻 P S S R F A M 陸興 乾德番砧 蘇粉 號(hào) 乾德番砧 P S O L S S R H E X 壽研黃櫻 壽研橙櫻 安第斯 乾德粉如意 小湯姆 浙雜 P S O L S S R F A M 冠群五號(hào) 壽研橙櫻 金陵佳玉 愛吉佳麗 P S S R R O X 壽研黃櫻 浙雜 P S O L S S R T A M R A 小湯姆 壽研黃櫻 乾德M 蘇粉 號(hào) 寧番 號(hào) 金星 浙雜 壽研 號(hào) NY T 表D 續(xù) 引物編號(hào)引物名稱熒光標(biāo)記等位變異范圍 b p主要等位變異 b p參照品種 P S O L S S R F A M 壽研 冠群五號(hào) 乾德紅如意 金粉 P T 壽研黃櫻 P S S R F A M 皖紅 壽研黃櫻 蘇粉 號(hào) 壽研 號(hào) P S O L S S R F A M 冠群五號(hào) 壽研橙櫻 中櫻 號(hào) P S O L S S R T A M R A 愛吉茱麗 壽研矮生紅櫻 金陵佳玉 壽研 P S S R H E X 寶祿 壽研黃櫻 壽研 號(hào) 京魯 號(hào) 金陵佳玉 飛天 P S O L S S R T A M R A 乾德番砧 寶祿 中櫻 號(hào) 乾德紅如意 P S O L S S R F A M 金粉 壽研矮生紅櫻 金陵佳玉 蘇粉 號(hào) P S O L S S R T A M R A 浙雜 壽研 號(hào) 乾德番砧 綻紅 P S S R H E X 寶祿 中櫻 號(hào) P S S R H E X 中櫻 號(hào) 寶祿 P S O L S S R H E X 乾德番砧 壽研 號(hào) 冠群五號(hào) P S O L S S R R O X 中櫻 號(hào) 天正紅珠 乾德M P S O L S S R T A M R A 京魯 號(hào) 寶祿 注 附錄D中采用的熒光標(biāo)記僅為示例 采用其他熒光標(biāo)記類型時(shí) 需要用參照品種校正數(shù)據(jù) 注 附錄D中未包括的等位變異 應(yīng)按本文件方法 確定其大小和相應(yīng)參照品種 注 附錄D中所列參照品種僅為示例 與參照品種具有相同等位變異的其他品種也可用作該等位變異的參照品種 NY T 附 錄 E 資料性 參照品種相關(guān)信息 參照品種相關(guān)信息見表E 表E 參照品種相關(guān)信息 編號(hào)品種名稱品種來源保藏編號(hào)編號(hào)品種名稱品種來源保藏編號(hào) 浙雜 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 金星 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 飛天 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N P T 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 蘇粉 號(hào) 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 陸興 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 金陵佳玉 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 愛吉佳麗 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 皖紅 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 安第斯 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 中櫻 號(hào) 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 金粉 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 壽研矮生紅櫻 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 綻紅 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 小湯姆 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 天正紅珠 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 壽研黃櫻 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 京魯 號(hào) 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 壽研橙櫻 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 愛吉茱麗 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 冠群五號(hào) 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 寧番 號(hào) 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 寶祿 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 乾德粉如意 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 乾德番砧 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 乾德紅如意 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 壽研 號(hào) 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 乾德M 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 壽研 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部植物 新品種保藏中心X I N 杭雜 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