河北保定地區(qū)黃瓜花葉病毒與馬鈴薯Y病毒復(fù)合侵染葉用萵苣分子鑒定.pdf

doi 10 19928 ki 1000 6346 2024 0024 https veg org 河北保定地區(qū)黃瓜花葉病毒與馬鈴 薯 Y 病 毒復(fù)合侵染葉用萵苣分子鑒定 陳利達(dá) 李暢 李敬蕊 呂桂云 吳曉蕾 宮彬彬 高洪波 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部華北節(jié)水農(nóng)業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 河北省蔬菜產(chǎn)業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心 河北省 蔬菜種質(zhì)創(chuàng)新與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 河北保定 071000 摘 要 利用 RT PCR 方法對(duì)采集自河北保定地區(qū)的疑似葉用萵苣病毒病樣品進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定 并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化 樹(shù) 結(jié)果表明 特異性引物 CMV 和 PVY 分別擴(kuò)增得到大小為 260 420 bp 的單一條帶 通過(guò)核苷酸序列 Blast 比對(duì)及系 統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析 河北保定地區(qū)葉用萵苣病毒分離物分別與印度番茄 CMV 分離物 MN514839 1 印度馬鈴薯 PVY 分離物 JX945850 1 聚在同一分支上 同源性分別為 95 92 本研究首次檢測(cè)到河北保定地區(qū)葉用萵苣病毒病是由 CMV 與 PVY 復(fù)合侵染所致 關(guān)鍵詞 葉用萵苣 黃瓜花葉病毒 馬鈴薯 Y病毒 復(fù)合侵染 Molecular Identification of Co infection of Cucumber mosaic virus and Potato virus Y on Lettuce in Baoding Hebei CHEN Lida LI Chang LI Jingrui LYU Guiyun WU Xiaolei GONG Binbin GAO Hongbo College of Horticulture Hebei Agricultural University Key Laboratory of North China Water saving Irrigation Engineering Collaborative Innovation Center of Vegetable Industry in Hebei Hebei Key Laboratory of Vegetable Germplasm Innovation and Utilization Baoding 071000 Hebei China Abstract The suspected lettuce virus disease stain collected from Baoding City Hebei Province was molecular biology identified by RT PCR method and the phylogenetic tree was constructed The results showed that specific primers CMV and PVY amplified single bands with sizes of 260 bp and 420 bp respectively Through nucleotide sequence Blast alignment and phylogenetic tree analysis it was found that the lettuce virus isolate from Baoding City Hebei Province was clustered on the same branch as the Indian tomato CMV isolate MN514839 1 and the Indian potato PVY isolate JX945850 1 with homology of 95 and 92 respectively The research first detected that the lettuce virus disease was caused by the combined infection of CMV and PVY in Baoding City Hebei Province Keywords lettuce Cucumber mosaic virus CMV Potato virus Y PVY complex infection 陳利達(dá) 男 博士 副教授 主要從事設(shè)施蔬菜病害診斷與綠色生物防控研究 E mail 15369301173 通信作者 Corresponding author 高洪波 女 博士 教授 主要從事設(shè)施蔬菜逆境生理與分子生物學(xué)研究 E mail hongbogao 收稿日期 2023 08 04 接受日期 2023 10 15 基金項(xiàng)目 河北省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系設(shè)施蔬菜創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目 HBCT2021030213 河北省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目 21326903D 承德市科技計(jì)劃項(xiàng) 目 202305B044 69 中 國(guó) 蔬 菜 CHINA VEGETABLES 研究論文 2024 5 69 74葉用萵苣 Lactuca sativa L 為菊科萵苣屬草 本植物 在世界各地廣泛栽植 具有降低膽固醇 清熱促血及養(yǎng)胃等食用和藥用價(jià)值 Altunkaya Goekmen 2008 Dannehl Suhl 2016 李雅博 等 2017 田原源 等 2024 伴隨葉用萵苣的消費(fèi)需 求量日益增長(zhǎng) 其栽培面積不斷擴(kuò)大 連作現(xiàn)象較 為普遍 隨之病害日益加重 成為影響葉用萵苣產(chǎn) 量和品質(zhì)的重要因素 給農(nóng)戶造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失 病毒病是葉用萵苣上常見(jiàn)的病害 感病植株常 表現(xiàn)葉片皺縮 褪綠 花葉和畸形等典型癥狀 目 前 國(guó)際上已知報(bào)道的葉用萵苣病毒種類高達(dá) 20 余種 主要包括黃瓜花葉病毒 Cucumber mosaic virus CMV 萵苣花葉病毒 Lettuce mosaic virus LMV 番茄斑萎病毒 Tomato spotted wilt virus TSWV 馬鈴薯 X 病毒 Potato virus X PVX 萵苣褪綠病毒 Lettuce chlorosis virus LCV 馬鈴薯Y 病毒 Potato virus Y PVY 蕪菁花葉病毒 Turnip mosaic virus TuMV 馬 鈴薯 S 病毒 Potato virus S PVS 蠶豆萎蔫病 毒 Broad bean wilt virus BBWV 苜?；ㄈ~病 毒 Alfalfa mosaic virus AMV 甜菜西方黃化病 毒 Beet western yellows virus BWYV 煙草環(huán) 斑病毒 Tobacco ring spot virus TRSV 煙草線 條病毒 Tobacco streak virus TSV 南芥菜花葉 病毒 Arabis mosaic virus ArMV 煙草壞死病 毒 Tobacco necrosis virus TNV 等 而我國(guó)現(xiàn) 已報(bào)道的葉用萵苣病毒種類主要為 LMV PVX CMV TSWV PVS 等 Stubbs et al 1969 Soleimani et al 2011 Aranzazu Alberto 2012 常澤 2014 Sharma et al 2016 盧蝶 2019 李 靜汝 等 2022 葉用萵苣病毒病受當(dāng)?shù)氐沫h(huán)境 品種 栽培管 理等因素影響較大 不同地區(qū)的病毒種類存在較大 差異 本試驗(yàn)對(duì)采集自河北保定地區(qū)的疑似葉用萵 苣病毒病葉片進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定 以期探明引起 該地區(qū)葉用萵苣病毒病的病毒種類 并對(duì)蔬菜病毒 病檢測(cè)預(yù)警及綜合防控提供有效技術(shù)支撐 1 材料與方法 1 1 試驗(yàn)材料 2023 年 在河北農(nóng)業(yè)大學(xué)教學(xué)試驗(yàn)基地發(fā)現(xiàn) 水培葉用萵苣植株表現(xiàn)為新葉皺縮 卷曲等疑似病 毒病癥狀 隨后采集 3份葉用萵苣葉片樣本 液氮 處理后送至實(shí)驗(yàn)室 保存于 70 冰箱 葉用萵苣品種為羅馬寶石綠 購(gòu)自瑞克斯旺 中國(guó) 農(nóng)業(yè)科技有限公司 1 2 葉用萵苣葉片總 RNA 提取及反轉(zhuǎn)錄 采用常規(guī) TRIzol 法 薩姆布魯克和拉塞爾 2002 提取葉用萵苣葉片總 RNA 全程在離心機(jī) 上低溫 4 離心 取 200 mg 葉片于液氮中研磨 將 0 2 g粉末移入 1 5 mL離心管并加入 1 mL TRIzol 試劑 英濰捷基 上海 貿(mào)易有限公司 振蕩混勻 室溫靜置 5 min 12 000 r min 1 離心 10 min 將上 清液轉(zhuǎn)入 1 5 mL 離心管并加入 0 2 mL 氯仿混勻 室溫放置 5 min 12 000 r min 1 離心 10 min 取水 相 400 L 加入等體積異丙醇 室溫靜置 10 min 12 000 r min 1 離心 10 min 棄上清液并加入 1 mL 75 乙醇洗滌沉淀2 次 12 000 r min 1 離心5 min 自然晾干加入 50 L RNase Free ddH 2 O溶解 以葉用萵苣健康植株葉片總 RNA 為陰性對(duì)照 80 保存?zhèn)溆?以葉用萵苣發(fā)病葉片總 RNA 為模板 使用 cDNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒 天根生化科技 北京 有限 公司 合成病毒 cDNA 反應(yīng)體系 10 L 和反 應(yīng)程序參考陳利達(dá)等 2020 的方法進(jìn)行 1 3 RT PCR 檢測(cè) 利用 15 種葉用萵苣常見(jiàn)病毒的特異性引物 表 1 對(duì)反轉(zhuǎn)錄 cDNA 進(jìn)行 RT PCR 檢測(cè) 3 次 重復(fù) PCR 擴(kuò)增體系 2 Taq PCR Master Mix 10 L 上 下游引物各 0 5 L cDNA 模板 1 L ddH 2 O補(bǔ)足至 20 L PCR 擴(kuò)增條件 95 預(yù)變性 3 min 95 變性 30 s 55 退火 30 s 72 延伸 45 s 共 35 個(gè)循環(huán) 72 補(bǔ)充延伸 10 min PCR 產(chǎn)物經(jīng) 1 5 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè) 利用全自動(dòng)凝 膠成像系統(tǒng)拍照 1 4 序列分析及系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建 選取具有明顯條帶的 PCR 產(chǎn)物 配制 50 L 體系送至博邁德科技 北京 有限公司進(jìn)行基因組 測(cè)序 通過(guò)NCBI http blast ncbi nlm nih gov 網(wǎng)站在線進(jìn)行 Blast 比對(duì) 采用鄰接法 Neighbor joining NJ 構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù) 確定檢測(cè)病毒 的種類 70 中 國(guó) 蔬 菜 CHINA VEGETABLES 研究論文2 結(jié)果與分析 2 1 葉用萵苣病毒病的田間癥狀 河北保定地區(qū)葉用萵苣病毒病的發(fā)病癥狀如圖 1所示 主要表現(xiàn)為葉片皺縮 心葉扭曲 老葉邊 緣處伴有褐色壞死斑點(diǎn)及壞死支脈 新葉則是在生 長(zhǎng)期出現(xiàn)大量的水泡狀凸起 2 2 葉用萵苣病毒的 RT PCR 檢測(cè)結(jié)果 利用 15 種葉用萵苣病毒的特異性引物對(duì)發(fā)病 葉片 cDNA進(jìn)行 RT PCR擴(kuò)增 結(jié)果表明 圖 2 3 表 1 15 種葉用萵苣病毒的特異性引物信息 病毒 種類 引物序列 5 3 PCR 產(chǎn) 物 bp 參考文獻(xiàn) CMV F GGGGTACCTAGTGAGCGCTGTAAACCTGGAT 260 王少立 等 2017 R GCTCTAGAAATTTGTTGTTGGCTTGAACGC LMV F CATCAACGCAGGGCTACATGGTAAACACA 272 向均 等 2018 R TCCCGTTTTCTATACACCAAACCATCAATC PVX F AGTGGTATGGAACTGGATG 308 孫琦和張春慶 2003 R TTATGGTGGTGGTAGAGTGA PVY F GCTCTAGAAGTTTGGGTTATGATGGATGGGGATG 420 王少立 等 2017 R CGGAATTCAATCACCCTGCCACCTCTATC BBWV F TTGAACCCGGAAAAAGGGAGTGTG 1 300 張建云 等 2013 R TTGCTAGGYCCAGGYAAATTGTA PVS F AAAGTGTGCAGGCTGTATGC 302 程勝群 等 2020 R ATCTCAGCGCCRAGCAT AMV F CGAATCGAACGTAAGCAA 321 高艷玲 等 2022 R ATGATTCGTTGAAGAAGATAA BWYV F GAYTGYTCYGGTTTTGACTGG 1 410 左琳彧 等 2016 R CGTCTACCTATTTSGGRTTN TSWV F AACCCCGAACATTTCATAGA 425 陳利達(dá) 等 2020 R TCAGACAGGATTGGAGCCAC TuMV F TAAACGGAATGTGGGTGATGATGG 377 王少立 等 2017 R GTCCTCGGTCGTATGCCTTTCC LCV F GATGGCAGATCATG 1 380 馮麗肖 等 2022 R TGTGTTTGTTCTTCAACAACAC TRSV F TATTATGACGCCAACACTCT 437 郇曉雪 等 2021 R AGTATCAGACCTCCAACCA TSV F TTTGG GTAACTCGC AAAGCGAGT 404 魏梅生 等 2006 R TCTTCTGGTGGCATCAAG GGA GCTGGTT ArMV F CCAGTGCCTACAAGAGTGTGTC 580 于翠 等 2008 R TGAGCAAAAGGATTGTCTCCAAGG TNV F AAGA T C T A CAA T C ACATT A T C A T G ATCG 3 530 席德慧 等 2007 R A C T TA G A A C T G A TTCAT T G G T A T G GG G A TTGA 圖 1 河北保定地區(qū)葉用萵苣病毒病的發(fā)病癥狀 A B C 71 中 國(guó) 蔬 菜 CHINA VEGETABLES 研究論文特異性引物 CMV F CMV R 和 PVY F PVY R 分 別在 260 bp 和 420 bp 處擴(kuò)增出唯一條帶 且病毒 檢測(cè)重復(fù)性較好 而其他葉用萵苣病毒引物和陰性 對(duì)照均未擴(kuò)增出相應(yīng)條帶 表明 河北保定地區(qū)葉 用萵苣病毒病是由 CMV 和 PVY 兩種病毒復(fù)合侵 染所致 2 3 CMV 和 PVY 系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建 由圖 4 5 可見(jiàn) 河北保定地區(qū)葉用萵苣病 毒病分離物中 一類與 CMV 核苷酸序列有較高 的相似性 60 95 與印度番茄CMV 分 離物 MN514839 1 聚類在同一分支 同源性 高達(dá)95 另一類與印度馬鈴薯PVY 分離物 圖 5 基于 PVY 基因組部分核苷酸序列構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù) 圖 3 CMV 和 PVY 特異性引物的 RT PCR 擴(kuò)增結(jié)果 M BM2000 DNA Marker 1 3 CMV 4 6 PVY 2 000 bp 1 000 bp 750 bp 500 bp 250 bp 100 bp M 1 2 3 4 5 6 圖 2 15 種葉用萵苣病毒特異性引物的 RT PCR 擴(kuò)增結(jié)果 M BM2000 DNA Marker 1 CMV 2 LMV 3 PVX 4 PVY 5 BBWV 6 PVS 7 AMV 8 BWYV 9 TSWV 10 TuMV 11 LCV 12 TRSV 13 TSV 14 ArMV 15 TNV N 陰性對(duì)照 2 000 bp 1 000 bp 750 bp 500 bp 250 bp 100 bp M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 N 圖 4 基于 CMV 基因組部分核苷酸序列構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù) Bulgaria Citrullusl anatus LN810058 1 China Yunnan Banana KT302202 1 Spain Lycopersicone sculentum AJ829778 1 India Lycopersicone sculentum M N China Hebei Lactuca sativa Spain Cucumis melo KU976474 1 SouthK orea Capsicuma nnuum ON759513 1 SouthK orea Stellariaa quatica A B109909 1 China Zhejiang Raphanuss ativus AJ632088 1 Malaysia Pipern igrum AM Japan Torilis japonica L C626023 1 514839 1 084369 1 95 93 85 72 86 81 60 75 Kazakhstan Solanum tuberosum MK639792 1 Iran Solanum tuberosum HM243480 1 India Solanum tuberosum JX945850 1 China Hebei Lactuca sativa Hungary Solanum tuberosum AJ390300 1 France Solanum tuberosum MZ673227 1 Germany Solanum tuberosum MH937417 1 France Solanum lycopersicum MN216363 1 Germany Solanum lycopersicum OP525288 1 Slovakia Solanum tuberosum MW595183 1 82 88 81 98 Finland Solanum tuberosum JX432982 1 92 78 94 84 72 中 國(guó) 蔬 菜 CHINA VEGETABLES 研究論文 JX945850 1 聚類在同一分支 同源性達(dá)到 92 進(jìn)一步明確河北保定地區(qū)葉用萵苣病毒病分 離物為 CMV和 PVY復(fù)合型病毒 3 結(jié)論與討論 本試驗(yàn)采用 RT PCR 方法對(duì)河北保定地區(qū)葉 用萵苣病毒病進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育 進(jìn)化樹(shù) 結(jié)果表明河北保定地區(qū)的葉用萵苣病毒病 是由 CMV和 PVY復(fù)合侵染所致 CMV 為雀麥花葉病毒科 Bramoviridae 黃瓜 花葉病毒屬 Cucumovirus 可侵染 85 科 365 屬 1 200 種單 雙子葉植物 主要通過(guò)蚜蟲(chóng)傳毒 種 苗帶毒或者汁液摩擦等方式傳播 是目前侵染寄 主范圍最多 分布最廣 破壞性最強(qiáng)的植物病毒 之一 Scholthof et al 2011 CMV 侵染葉用萵苣 后葉片形成不規(guī)則的斑駁 葉緣皺縮伴有不規(guī)則 斑點(diǎn) 葉緣向下卷曲等癥狀 李靜汝 等 2022 PVY 屬于馬鈴薯病毒科 Potyviridae 馬鈴薯病毒 屬 Potyvirus 其寄主范圍已達(dá)到 9科 14屬 Gray et al 2010 PVY于 1931年首次在馬鈴薯上被發(fā) 現(xiàn) 主要通過(guò)蚜蟲(chóng)傳毒 寄主組織摩擦 種苗帶毒 以及嫁接等方式傳播 Smith 1931 近年來(lái) 多種病毒復(fù)合侵染單一作物的現(xiàn)象頻 繁發(fā)生 絕大多數(shù)植物病毒均為系統(tǒng)性侵染方式 并且多數(shù)病毒侵染植株后發(fā)病癥狀大同小異 導(dǎo)致 無(wú)法準(zhǔn)確鑒別病毒種類并對(duì)癥用藥 基于分子生物 學(xué)方法檢測(cè)蔬菜病毒的種類是目前較為常見(jiàn) 實(shí)用 性較強(qiáng)的手段 2015年云南地區(qū)發(fā)現(xiàn)葉用萵苣 萵 筍等葉菜類蔬菜出現(xiàn)葉片黃化 褪綠和壞死斑的疑 似病毒病癥狀 經(jīng) ELISA 病毒基因檢測(cè) 結(jié)果表 明侵染葉用萵苣的病毒種類為 TSWV 鄭寬瑜 等 2015 馮黎霞等 2017 采用 ELISA 方法證實(shí)了 TSWV 可存活于葉用萵苣種子上 屬于種傳病毒 常澤 2014 通過(guò)非序列依賴性 PCR 擴(kuò)增 SIA 方法 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)山西太谷地區(qū)的葉用萵苣病毒病是 由 CMV 與 PVS 復(fù)合侵染所致 本試驗(yàn)采用 RT PCR方法首次檢測(cè)出河北保定地區(qū)葉用萵苣病毒病 是由 CMV 與 PVY 復(fù)合侵染所致 這可能是由于 農(nóng)事操作管理不當(dāng)或昆蟲(chóng)交互傳毒引起的 成為葉 用萵苣病毒交叉感染的重要因素之一 此外 青玲 等 2009 采用 ELISA 方法檢測(cè)出重慶地區(qū)葎草 CMV 和 PVY 復(fù)合侵染現(xiàn)象較為嚴(yán)重 鑒于葎草 是植物病毒的潛在中間寄主 常生長(zhǎng)在棚室角落 路邊或水渠處 極有可能成為蔬菜病毒病的潛在初 侵染源 應(yīng)加以重視與檢疫 因此 需做好葉用萵 苣病毒病的相關(guān)調(diào)查 在生產(chǎn)中采取綜合防控措 施 既要加強(qiáng)種子檢疫工作 也要注意防治病害和 清除種植地周邊雜草 減少病毒病造成的農(nóng)田經(jīng)濟(jì) 損失 參考文獻(xiàn) 常澤 2014 生菜病毒病病原鑒定及其病毒全基因組序列測(cè)定與分 析 碩士論文 晉中 山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 陳利達(dá) 石延霞 謝學(xué)文 曹金強(qiáng) 柴阿麗 李寶聚 2020 我國(guó) 不同地區(qū)番茄主要病毒病種類的分子檢測(cè)與分析 華北農(nóng)學(xué) 報(bào) 35 1 185 193 程勝群 呂文河 高艷玲 白艷菊 范國(guó)權(quán) 2020 馬鈴薯 S病毒 RT qPCR 通用檢測(cè)體系的建立與應(yīng)用 華北農(nóng)學(xué)報(bào) 35 6 187 194 馮黎霞 武目濤 于翠 吳興海 2017 由美國(guó)進(jìn)境生菜種子上番 茄斑萎病毒的檢測(cè)鑒定 中國(guó)植保導(dǎo)刊 37 1 9 12 馮麗肖 胡榮 卜姍 張德詠 羅香文 李凡 丁銘 張卓 張松 柏 劉勇 2022 云南省番茄萵苣褪綠病毒分子檢測(cè)及遺傳 進(jìn)化分析 園藝學(xué)報(bào) 49 1 141 147 高艷玲 范國(guó)權(quán) 程勝群 張威 邱彩玲 申宇 聶先舟 白艷菊 呂文河 2022 苜?；ㄈ~病毒 RT PCR 和 RT qPCR 檢測(cè)技術(shù) 體系的建立與應(yīng)用 植物保護(hù)學(xué)報(bào) 49 2 515 527 郇曉雪 劉曉宇 房樂(lè) 杜傳印 李廣強(qiáng) 耿超 李向東 田延平 2021 煙草環(huán)斑病毒 RT PCR檢測(cè)體系的優(yōu)化 山東農(nóng)業(yè)科學(xué) 53 6 98 102 李靜汝 張磊 孫平平 王永 付崇毅 司魯俊 張稱心 李正男 2022 侵染 5種葉菜類蔬菜的病毒研究進(jìn)展 北方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 50 4 122 134 李雅博 李婷 韓瑩琰 范雙喜 2017 葉用萵苣熱激蛋白基因 LsHsp70 2711 的克隆及高溫脅迫下的功能分析 中國(guó)農(nóng)業(yè)科 學(xué) 50 8 1486 1494 盧蝶 2019 北京地區(qū)生菜病害調(diào)查及防治藥劑篩選 碩士論文 北京 北京農(nóng)學(xué)院 青玲 楊水英 孫現(xiàn)超 王進(jìn)軍 周常勇 2009 從葎草中檢出復(fù) 合侵染的多種病毒 植物保護(hù) 35 4 138 140 薩姆布魯克 J 拉塞爾 D W 2002 分子克隆實(shí)驗(yàn)指南 北京 科 學(xué)出版社 孫琦 張春慶 2003 馬鈴薯 X病毒的 RT PCR 檢測(cè) 園藝學(xué)報(bào) 30 6 687 689 田原源 查凌雁 王座祺 段逸文 魏仕偉 章競(jìng)瑾 2024 紅光 補(bǔ)充 UV A 對(duì)葉用萵苣倍半萜內(nèi)酯類化合物的調(diào)控效應(yīng) 中 國(guó)蔬菜 3 51 58 王少立 譚瑋萍 楊園園 代惠潔 孫曉輝 喬寧 竺曉平 2017 山東省辣椒主要病毒種類的分子檢測(cè)與鑒定 中國(guó)農(nóng) 73 中 國(guó) 蔬 菜 CHINA VEGETABLES 研究論文業(yè)科學(xué) 50 14 2728 2738 魏梅生 相寧 張春泉 Said A G 2006 煙草線條病毒 RT PCR 檢測(cè)方法 植物檢疫 3 136 138 席德慧 李江 曹淳 韓成貴 李大偉 于嘉林 周雪平 2007 煙草壞死病毒 A 大豆分離物的分子鑒定 植物病理學(xué)報(bào) 37 6 595 603 向均 王垚 文朝慧 張永江 2018 萵苣花葉病毒 RT RPA 檢測(cè) 方法的建立 植物檢疫 32 4 48 51 于翠 楊翠云 張舒亞 喬艷艷 2008 南芥菜花葉病毒的幾種 PCR 檢測(cè)方法的建立和比較研究 植物病理學(xué)報(bào) 38 4 388 393 張建云 許文博 劉升學(xué) 黃家風(fēng) 2013 侵染加工番茄的 BBWV2 的分子鑒定及田間檢測(cè) 石河子大學(xué)學(xué)報(bào) 自然科學(xué) 版 31 6 675 679 鄭寬瑜 吳闊 董家紅 方琦 張仲凱 2015 番茄斑萎病毒對(duì)云 南萵苣類蔬菜的侵染危害 植物保護(hù) 41 5 174 178 左琳彧 雍容婧 袁雯 杜開(kāi)通 周濤 2016 北京地區(qū)辣椒上黃 瓜花葉病毒和甜菜西方黃化病毒復(fù)合侵染的分子鑒定 植物 保護(hù) 42 3 181 183 Altunkaya A Goekmen V 2008 Effect of various inhibitors on enzymatic browning antioxidant activity and total phenol content of fresh lettuce Lactuca sativa Food Chemistry 107 3 1173 1179 Aranzazu M Alberto F 2012 Virus diseases in lettuce in the Mediterranean Basin Advances in Virus Research 84 247 288 Dannehl D B C Suhl J 2016 Reuse of organomineral substrate waste from hydroponic systems as fertilizer in open field production increases yields flavonoid glycosides and caffeic acid derivatives of red oak leaf lettuce Lactuca sativa much more than synthetic fertilizer Journal of Agricultural and Food Chemistry 64 7068 7075 Gray S de Boer S Lorenzen J Karasev A Whitworth J Nolte P Singh R Boucher A Xu H M 2010 Potato virus Y an evolving concern for potato crops in the United States and Canada Plant Disease 94 12 1384 1397 Scholthof K B G Adkins S Czosnek H Palukaitis P Jacquot E Hohn T Hohn B Saunders K Candresse T Ahlquist P Hemenway C Foster G D 2011 Top 10 plant viruses in molecular plant pathology Molecular Plant Pathology 12 9 938 954 Sharma P Sharma S Singh J Saha S Baranwal V K 2016 Incidence of Lettuce mosaic virus in lettuce and its detection by polyclonal antibodies produced against recombinant coat protein expressed in Escherichia coli Journal of Virological Methods 230 53 58 Smith K M 1931 On the composite nature of certain potato diseases of the mosaic group as revealed by the use of plant indicators and selective methods of transmission Proceedings of the Royal Society of London 109 251 266 Soleimani P Mosahebi G Habibi M K 2011 Identification of some viruses causing mosaic on lettuce and characterization of Lettuce mosaic virus from Tehran Province in Iran African Journal of Agricultural Research 6 13 3029 3035 Stubbs L L Guy J A D Stubbs K J 1969 Control of lettuce necrotic yellows virus disease by the destruction of common sowthistle Sonchus oleraceus Australian Journal of Experimental Agriculture 9 10 215 218 74 中 國(guó) 蔬 菜 CHINA VEGETABLES 研究論文