不同栽培基質(zhì)對鐵皮石斛根基因表達的影響_陳宏宇.pdf

收稿日期 修訂日期 基金項目 貴州省科技計劃項目 黔科合基礎 一般 貴州中醫(yī)藥大學博士啟動基金 貴中醫(yī)博士啟動 號 作者簡介 陳宏宇 男 漢族 黑龍江齊齊哈爾人 貴州中醫(yī)藥大 學講師 博士學位 主要從事藥用植物研究工作 不同栽培基質(zhì)對鐵皮石斛根基因表達的影響 陳宏宇 于 瑩 楊 燁 黃 園 孫慶文 貴州中醫(yī)藥大學藥學院 貴州貴陽 貴州中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院 貴州貴陽 摘要 目的為了研究鐵皮石斛根在不同栽培基質(zhì)下的基因表達差異和調(diào)控通路 方法對栽培于碎松樹皮 泥炭土等 種基質(zhì)中的鐵皮石斛根部進行轉(zhuǎn)錄組測序并比較分析 結果從全部樣本中共獲得 條單基因 其中 個單基因在 等 個數(shù)據(jù)庫中獲得注釋 與對照相比 栽培于碎松樹皮 泥炭土 水苔 碎花生殼 刨花 椰 糠和森林腐葉土中的鐵皮石斛根分別有 和 個差異表達基因 結論實驗 說明不同栽培基質(zhì)對鐵皮石斛根部的基因表達有較大影響 這些差異表達基因可能是鐵皮石斛適應不同栽培基質(zhì)的重 要分子機理 對深入研究鐵皮石斛人工栽培技術提供參考和幫助 關鍵詞 鐵皮石斛 基質(zhì) 轉(zhuǎn)錄組 基因 標識 中圖分類號 文獻標識碼 文章編號 鐵皮石斛 是蘭科石斛屬 的名貴藥用植物 鐵皮石斛性微寒 味甘 滋陰清熱 益胃生津 主要用于熱病傷津 病后虛熱 口干煩渴的治療 現(xiàn)代藥理學表 明 鐵皮石斛具有降血糖 抗衰老 增強人體免疫力和促進消化等 作用 鐵皮石斛生長環(huán)境要求高 自然繁殖緩慢 野生資源 急劇減少 為了滿足市場需要 目前主要通過附石 附樹或大棚 等仿野生栽培對鐵皮石斛進行人工種植 除種苗質(zhì)量 溫濕 度 光照和病蟲害等常見因素外 栽培基質(zhì)對鐵皮石斛的成活率 產(chǎn)量和品質(zhì)有重要影響 研究鐵皮石斛在不同栽培基質(zhì)中的 基因表達差異 揭示分子調(diào)控機制 可為鐵皮石斛人工栽培工作 提供幫助 鐵皮石斛栽培基質(zhì)要求通風 透水 營養(yǎng)適合以及良好的微 生物環(huán)境 常用的基質(zhì)包括松樹皮 苔蘚 泥炭 木屑等 混合一 定比例的天然礦物 對鐵皮石斛的生長發(fā)育和藥效物質(zhì)形成有較 好作用 例如 研究表明在鐵皮石斛組培苗移栽馴化時期 細陶 粒 腐殖土 珍珠巖 刨花 椰糠 木炭 松樹皮 紅火山巖 和松樹皮 木屑 等 基質(zhì)的移栽成活率較高 在鐵皮石斛大棚栽培時期 移栽 后 松樹皮 鋸末 碎瓦片 的株高為 莖粗為 泥炭 樹皮 刨花 的株高為 莖粗 為 松鱗 碎石子 刨花 的株高為 莖粗為 松樹皮 香菇廢菌糠 的株高為 莖粗為 利用高效液相色譜法 研究了松樹皮 椰子椰殼和松樹皮 椰子椰殼 種基質(zhì)對鐵皮石斛莖代 謝物的影響 實驗說明不同栽培基質(zhì)或不同基質(zhì)組合對鐵皮 石斛人工栽培有較大影響 轉(zhuǎn)錄組是細胞或組織內(nèi)全部 轉(zhuǎn)錄本的總和 高通量測 序技術用于大規(guī)模分析基因表達并識別基因調(diào)控通路 轉(zhuǎn)錄 組測序在鐵皮石斛功能基因識別 生長發(fā)育機制和分子標記等方 面有廣泛應用 利用鐵皮石斛莖轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù) 識別石斛堿等多種 次生代謝產(chǎn)物生物合成關鍵基因 利用數(shù)字基因表達譜對鐵 皮石斛莖不同發(fā)育階段進行基因表達比較 識別莖發(fā)育關鍵基 因 利用鐵皮石斛低溫脅迫轉(zhuǎn)錄組 預測 和 等 低溫調(diào)控基因 利用不同發(fā)育程度鐵皮石斛轉(zhuǎn)錄組 研究果 糖和甘露糖等多糖合成基因 利用鐵皮石斛早期 中期花蕾 和開放花朵轉(zhuǎn)錄組 識別 葉綠素和類胡蘿卜素生物合成 關鍵基因 栽培基質(zhì)對鐵皮石斛的生長發(fā)育有重要影響 為了探究鐵 皮石斛在不同栽培基質(zhì)下的基因應答機制 本研究對栽培于碎松 樹皮 泥炭土 水苔 碎花生殼 刨花 椰糠和森林腐葉土中的鐵皮 石斛根進行轉(zhuǎn)錄組測序并比較分析 利用基因表達差異和基因 調(diào)控通路 初步揭示鐵皮石斛根在不同栽培基質(zhì)中的應答信息 為鐵皮石斛人工栽培研究提供參考 時珍國醫(yī)國藥 年第 卷第 期 材料與方法 試驗材料鐵皮石斛由本實驗室提供 初始基質(zhì)為碎松樹皮 刨花 人工氣候室 光照 天 經(jīng)貴州中醫(yī)藥 大學楊燁鑒定準確 取生長發(fā)育程度基本相同的植株 小心沖洗 去除原栽培基質(zhì)后 靜置 期間每天向根噴水保濕 待處理 時 將植株分為 組 其中 組繼續(xù)保濕放置作為 對照 另外 組分別用碎松樹皮 泥炭土 水苔 碎花生殼 刨花 椰糠和森林 腐葉土仔細覆蓋根部 噴水保濕 后 洗凈根部基質(zhì) 各取等 量樣本 混樣液氮冷凍 提取與測序利用 提取 去除 檢查 質(zhì)量和純度后反轉(zhuǎn)錄 利用 平臺進行測序 原始測 序數(shù)據(jù)利用軟件 去除接頭序列 即接頭污染 含 堿基大于 以及低質(zhì)量讀序 即質(zhì)量值低于 的堿基 占該 總堿基數(shù)比例大于 利用 程序 從頭拼接組裝 拼接 聚類和去冗余處理后 得到非 冗余單基因 序列 利用 和 等數(shù)據(jù) 庫進行基因注釋 基因表達與調(diào)控通路分析利用 程序 的 方法計算基因 表達量 利用 計算差異表達基因 以 個樣本間基因 表達差異 大于 倍 且 定義為顯著差異表達 基因 利用 數(shù)據(jù)庫 對差異表達基因 進行聚類分析 定義為顯著富集 利用 數(shù) 據(jù)庫 對基因進行調(diào)控 通路注釋 推測基因生物功能 結果 測序與注釋對鐵皮石斛根 個對照和 個處理 共 個樣 本進行測序 去除低質(zhì)量數(shù)據(jù)后 分別獲得 和 的 數(shù)據(jù) 所有樣本 檢測值均大于 檢測值均大于 從頭組裝后 共獲得 條長的 非冗余單基因 在單基因中識別編碼區(qū) 共得到 個 序 列 長度分布在 之間 含量為 利用 和 數(shù)據(jù)庫分別 注釋了 和 個單基 因 共 個單基因 其中 個數(shù)據(jù)庫均有注釋的基因有 個 差異表達基因分析不同基質(zhì)對鐵皮石斛根誘導基因表達 的數(shù)量不同 經(jīng)過計算 與對照相比 栽培于碎松樹皮 泥炭土 水苔 碎花生殼 刨花 椰糠和森林腐葉土中的鐵皮石斛根分別有 和 個差異表達基 因 表 結果表明 鐵皮石斛根接觸基質(zhì)后均發(fā)生較大程度的 基因表達變化 說明基質(zhì)中所含的營分或其它成分對根部產(chǎn)生了 強烈信號 并引起相應基因表達 而且不同栽培基質(zhì)對鐵皮石斛 根基因表達有較大差異 水苔和刨花對根基因表達的影響相對 較小 而其它基質(zhì)對根基因表達的影響相對較大 其中 碎花生 殼對根上調(diào)表達基因最多 表 鐵皮石斛在不同栽培基質(zhì)下的差異表達基因數(shù)量 基質(zhì)種類上調(diào)表達基因下調(diào)表達基因總差異表達基因 碎松樹皮 泥炭土 水苔 碎花生殼 刨花 椰糠 森林腐葉土 基因調(diào)控通路分析利用 聚類分析對顯著差異表達基 因進行功能分類 研究具有相同代謝過程或細胞途徑的基因類 群 結果表明 鐵皮石斛根對于不同基質(zhì)應答基因有 個顯著 富集功能聚類 分為 大類 生物過程 細胞組 分 和分子功能 分別有 和 個功能聚類 表 結果表明 不同基質(zhì)對根基因表 達影響在基因類別上是不同的 如生物過程類別中的生物粘附 功能基因 水苔基質(zhì)對應的應答基因有 個 明顯多于其它基 質(zhì) 而生物間相互作用的生物學過程功能基因 水苔基質(zhì)和刨花 基質(zhì)對應的應答基因分別有 個和 個 明顯低于其它基質(zhì) 總體上 生物過程類別中的細胞過程和代謝過程 細胞組分類別 中的細胞結構體 分子功能類別中的結合和催化活性等包含的差 異表達基因數(shù)量最多 這些基因可能是鐵皮石斛應答基質(zhì)的關 鍵基因 同時 不同基質(zhì)間的基因分類差異可能是鐵皮石斛應答 不同基質(zhì)的關鍵基因 表 鐵皮石斛差異表達基因的 聚類分析 類別分類差異表達基因 數(shù)量碎松樹皮泥炭土水苔碎花生殼刨花椰糠森林腐葉土 生物過程生物粘附 生物間相互作用的生物學過程 生物種內(nèi)相互作用的生物學過程 生物調(diào)節(jié) 碳利用率 細胞過程 解毒 發(fā)育過程 生長 免疫系統(tǒng)過程 定位 移動 代謝過程 多細胞生物過程 生物過程負調(diào)節(jié) 氮利用 生物過程的正調(diào)節(jié) 生物過程調(diào)控 生殖 生殖過程 刺激應答 節(jié)律過程 信號 病毒過程 時珍國醫(yī)國藥 年第 卷第 期 續(xù)表 類別分類差異表達基因 數(shù)量碎松樹皮泥炭土水苔碎花生殼刨花椰糠森林腐葉土 細胞組分細胞結構體 含蛋白質(zhì)復合物 分子功能抗氧化活性 依賴性活性 結合 運貨受體活性 催化活性 細胞骨架運動活性 一般轉(zhuǎn)錄起始因子活性 分子接頭活性 分子載體活性 分子功能調(diào)控因子 分子轉(zhuǎn)導活性 養(yǎng)分儲存活性 蛋白質(zhì)折疊伴侶 蛋白質(zhì)標簽 小分子感受活性 結構分子活性 毒素活性 轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性 翻譯調(diào)控活性 轉(zhuǎn)運活性 利用 數(shù)據(jù)庫對差異表達基因進行生物學功能分析 推 測參與生化代謝或信號轉(zhuǎn)導途徑基因的相互協(xié)調(diào)特征 結果表 明 鐵皮石斛根對于不同基質(zhì)應答基因歸屬通路分為 大類 細 胞過程 環(huán)境信息過程 遺傳信息過程 代謝和生物系統(tǒng)分別有 和 個通路 表 結果表明 不同基質(zhì)對根基因表達 影響在調(diào)控通路上是不同的 如遺傳信息分類中的復制和修復 通路基因 刨花基質(zhì)對應的應答基因有 個 明顯少于其它基 質(zhì) 總體上 代謝分類中的定位通路包含的差異表達基因數(shù)量最 多 細胞過程分類中的轉(zhuǎn)運和分解代謝通路 環(huán)境信息過程分類 中的信號轉(zhuǎn)導通路 遺傳信息分類中的折疊 分類和降解 轉(zhuǎn)錄和 翻譯通路 代謝分類中的氨基酸代謝 次級代謝產(chǎn)物生物合成 碳 水化合物代謝 能量代謝 脂質(zhì)代謝 輔助因子和維生素的代謝通 路 生物系統(tǒng)分類中的環(huán)境適應通路也包含了較多差異表達基 因 與 功能聚類類似的 這些基因可能是鐵皮石斛應答基質(zhì) 和不同基質(zhì)差異的關鍵基因 表 鐵皮石斛差異表達基因的 分析 類別分類差異表達基因 數(shù)量碎松樹皮泥炭土水苔碎花生殼刨花椰糠森林腐葉土 細胞過程轉(zhuǎn)運和分解代謝 環(huán)境信息過程膜轉(zhuǎn)運 信號轉(zhuǎn)導 遺傳信息折疊 分類和降解 復制和修復 轉(zhuǎn)錄 翻譯 代謝氨基酸代謝 次級代謝產(chǎn)物生物合成 碳水化合物代謝 能量代謝 定位 聚糖生物合成和代謝 脂質(zhì)代謝 輔助因子和維生素的代謝 其它氨基酸代謝 萜類化合物和聚酮類化合物代謝 核苷酸代謝 生物系統(tǒng)環(huán)境適應 轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄因子主要調(diào)控其它基因表達 本實驗基因 中 有 個被注釋為轉(zhuǎn)錄因子 表 列舉了幾種轉(zhuǎn)錄因子在 不同基質(zhì)中的表達差異 鈣調(diào)蛋白結合轉(zhuǎn)錄激活因子 受鈣調(diào)蛋白 的 調(diào)控 參與植物生長發(fā)育過程和非生物脅迫耐受調(diào)控 本實 驗識別了 個可能的 基因 表 在碎松樹皮 泥炭土 碎花生殼 椰糠和森林腐葉土中被誘導表達 是乙烯信號重 要轉(zhuǎn)錄因子 的同源基因 與植物發(fā)育 過程有關 本實驗識別了 個可能的 基因 表 包括 個乙烯敏感性 類似蛋白 和 個乙烯不敏感 類似蛋白 除水苔和刨花外 乙烯敏感性 類似蛋白 被誘導表達的程度 高于乙烯不敏感 類似蛋白 家族 是一類轉(zhuǎn)錄抑制因子 與其它轉(zhuǎn)錄因子互作或直接調(diào)控靶基因表 達 進而調(diào)控植物生長發(fā)育 本實驗識別了 個可能的 基因 表 注釋為轉(zhuǎn)錄抑制因子 在水 苔基質(zhì)中被明顯誘導表達 氮元素吸收相關基因 基因家族是硝酸鹽轉(zhuǎn)運 肽轉(zhuǎn) 運蛋白 的統(tǒng) 稱 運輸羧酸鹽 生長素 脫落酸和硫代葡萄糖苷等物質(zhì) 與氮元 素吸收有關 表 列舉了部分與氮元素吸收有關的基因及其 在不同基質(zhì)中的表達量差異 本實驗識別了 個可能的 基 因 表 和 注釋為 家 族轉(zhuǎn)運蛋白 只在水苔基質(zhì)中被誘導表達 其余基因在碎松樹 皮 泥炭土 碎花生殼 椰糠和森林腐葉土中被誘導表達 如 注釋為 家族 在碎松樹皮 泥炭土 和森林腐葉土中被明顯誘導表達 時珍國醫(yī)國藥 年第 卷第 期 表 鐵皮石斛幾種轉(zhuǎn)錄因子在不同栽培基質(zhì)下的表達量 基因家族基因 編號基因注釋 對照碎松樹皮泥炭土水苔碎花生殼刨花椰糠森林腐葉土 鈣調(diào)素結合轉(zhuǎn)錄激活劑 樣亞型 鈣調(diào)素結合轉(zhuǎn)錄激活劑 樣亞型 鈣調(diào)素結合轉(zhuǎn)錄激活劑 樣亞型 鈣調(diào)素結合轉(zhuǎn)錄激活劑 樣亞型 假定蛋白 蛋白 類似 蛋白 類似 乙烯敏感性 類似蛋白 乙烯不敏感 類似蛋白 乙烯敏感性 類似蛋白 乙烯敏感性 類似蛋白 乙烯敏感性 類似蛋白 乙烯不敏感 類似蛋白 同源盒蛋白結合 類似 亞型 同源盒蛋白結合 類似 同源盒蛋白結合 類似 亞型 同源盒蛋白結合 類似 同源盒蛋白結合 類似 亞型 同源盒蛋白結合 類似 亞型 轉(zhuǎn)錄抑制因子 轉(zhuǎn)錄抑制因子 轉(zhuǎn)錄抑制因子 假定蛋白 轉(zhuǎn)錄抑制因子 轉(zhuǎn)錄抑制因子 鋅指同源結構域蛋白 鋅指同源結構域蛋白 簡化的鋅指蛋白 鋅指同源結構域蛋白 類似 簡化的鋅指蛋白 類似 表 鐵皮石斛氮吸收相關基因在不同栽培基質(zhì)下的表達量 基因家族基因 編號基因注釋 對照碎松樹皮泥炭土水苔碎花生殼刨花椰糠森林腐葉土 家族轉(zhuǎn)運蛋白 家族轉(zhuǎn)運蛋白 家族 類似 家族 亞基 家族 家族 亞基 家族 家族 類似 家族 亞基 硝酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白 家族 家族 亞基 家族 亞基 家族 亞基 家族 亞基 家族 亞基 預測的肽 硝酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白 高度關聯(lián)硝酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白 家族 家族 類似 家族 家族 家族 亞基 預測的肽 硝酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白 硝酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白 家族 亞基 硝酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白 家族 預測的肽 硝酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白 家族 家族 亞基 家族 亞基 生長調(diào)控因子 類似 生長調(diào)控因子 生長調(diào)控因子 生長調(diào)控因子 信號相關基因 是促分裂原活化蛋白激酶 家族 分為 和 按信 號來源分類 分別逐級激活調(diào)控下游其它基因的表達 表 列舉 了識別得到的 基因和 基因 及其在不同基質(zhì)中的表 達量差異 本實驗識別了 個可能的 基因 表 在不同基 質(zhì)中呈現(xiàn)多樣的表達方式 如 注釋為 在 水苔基質(zhì)中被明顯誘導表達 注釋為 在刨 花基質(zhì)中被明顯誘導表達 注釋為 亞基 時珍國醫(yī)國藥 年第 卷第 期 在椰糠基質(zhì)中被明顯誘導表達 表 鐵皮石斛 和 基因在不同栽培基質(zhì)下的表達量 基因家族基因 編號基因注釋 對照碎松樹皮泥炭土水苔碎花生殼刨花椰糠森林腐葉土 亞基 類似 類似亞基 亞基 亞基 類似 亞基 類似 類似 同系物 預測的 類似 類似 亞基 亞基 類似亞基 亞基 類似 亞基 類似 亞基 類似 預測的 類似 部分 類似 類似 亞基 是鈣依賴性蛋白激酶 家族 是植物重要的 感受器之一 將 信號轉(zhuǎn)為磷 酸化級聯(lián)反應 在植物發(fā)育和環(huán)境信號轉(zhuǎn)導中起重要作用 表 列舉了部分 基因家族及其在不同基質(zhì)中的表達量差 異 本實驗識別了 個可能的 基因 表 與 家 族類似 在不同基質(zhì)中也呈現(xiàn)多樣的表達方式 如 注釋為 在水苔基質(zhì)中被明顯誘導表達 注釋為 在碎松樹皮 碎花生殼 椰糠和森林 腐葉土中被明顯誘導表達 但在泥炭土中誘導不明顯 表 鐵皮石斛 基因在不同栽培基質(zhì)下的表達量 基因 編號基因注釋 對照碎松樹皮泥炭土水苔碎花生殼刨花椰糠森林腐葉土 類似 類似 類似 類似 類似亞基 類似 部分 類似亞基 類似 類似 時珍國醫(yī)國藥 年第 卷第 期 討論 鐵皮石斛是名貴的藥用植物 栽培基質(zhì)是其人工種植的重要 影響因素之一 關于鐵皮石斛基質(zhì)對生長發(fā)育和藥用品質(zhì)的影 響已有較多報道 也因此總結獲得了大量利于其種植的基質(zhì)或基 質(zhì)組合 但是 鐵皮石斛為代表的石斛屬植物在不同栽培 基質(zhì)中的應答分子調(diào)控機制尚不明確 涉及的關鍵基因也未探 明 本研究利用松樹皮 泥炭土等 種常見栽培基質(zhì)對鐵皮石斛 根進行誘導處理 并對其進行轉(zhuǎn)錄組測序 探討鐵皮石斛在不同 基質(zhì)中的差異表達基因及其功能分類和調(diào)控通路 為揭示鐵皮石 斛應答不同基質(zhì)的分子機制奠定基礎 本實驗發(fā)現(xiàn)鐵皮石斛在碎松樹皮 泥炭土 水苔 碎花生殼 刨花 椰糠和森林腐葉土 種基質(zhì)中均有很多基因被不同程度地 誘導表達 說明鐵皮石斛根在接觸這些基質(zhì)后 都產(chǎn)生明顯的信 號響應 根據(jù)差異基因的數(shù)量 發(fā)現(xiàn)碎松樹皮 泥炭土 碎花生 殼 椰糠和森林腐葉土基質(zhì)對鐵皮石斛基因的影響較大 而水苔 和刨花基質(zhì)對其基因的影響相對較小 可能與碎松樹皮等基質(zhì) 包含更為豐富的營養(yǎng)物質(zhì)有關 而水苔和刨花基質(zhì)能提供給石斛 的養(yǎng)分物質(zhì)可能較少 或是其誘導基因相對較少的主要原因 轉(zhuǎn)錄組測序技術的優(yōu)勢是相對完整的反應全部基因的表達 本實驗通過幾個熱點基因類別對分子調(diào)控機制進行分析 轉(zhuǎn)錄 因子是一個很大的基因類別 也是在機體中起到關鍵調(diào)控作用的 基因之一 本實驗通過基因注釋 識別了 個轉(zhuǎn)錄因子 選 擇了幾種與植物生長發(fā)育和環(huán)境脅迫應答有關的幾種轉(zhuǎn)錄因子 進行列舉 表 此外 在表 中列舉了氮元素吸收有關的幾個 典型基因 表 和表 分別列舉了細胞中信號的相關基因 家族和 家族 通過這些基因在碎松樹皮 泥炭土 水苔 碎 花生殼 刨花 椰糠和森林腐葉土 種基質(zhì)中的表達量差異 為揭 示鐵皮石斛在不同基質(zhì)的響應機制提供參考 雖然這些零散的 基因表達數(shù)據(jù)尚不能形成完整的分子響應機制 但是隨著研究的 深入 以及對基因功能的挖掘與驗證 能逐步揭示鐵皮石斛根對 基質(zhì)的適應機理 參考文獻 邵 華 張玲琪 李俊梅 等 鐵皮石斛研究進展 中草藥 宋廣青 劉新民 王 瓊 等 石斛藥理作用研究進展 中草 藥 陳文強 汪小福 陳笑蕓 等 基于 和 技術鑒定浙江鐵 皮石斛的初步研究 浙江農(nóng)業(yè)學報 譚道鵬 何芋岐 石斛類藥材人工栽培發(fā)展概述 遵義醫(yī)科大 學學報 陳宜均 李康琴 鄧紹勇 等 鐵皮石斛栽培基質(zhì)研究進展 江 西林業(yè)科技 李關艷 蘇有勇 李思梅 等 鐵皮石斛栽培基質(zhì)的篩選研究 安徽農(nóng)業(yè)科學 陳寶玲 陳 爾 王華新 等 不同基質(zhì)配比對鐵皮石斛試管苗移 栽的影響 北方園藝 謝騰飛 張華通 何旭君 等 鐵皮石斛組織培養(yǎng)工廠化育苗及原 生態(tài)栽培技術研究 特產(chǎn)研究 張華通 吳坤林 何旭君 等 金釵石斛工廠化育苗試管苗移栽技 術研究 中國熱帶農(nóng)業(yè) 蘭 海 潘宏兵 和獻鋒 等 鐵皮石斛種植基質(zhì)篩選研究 四 川林業(yè)科技 吳 雅 史驥清 滕士元 等 鐵皮石斛組培苗移栽基質(zhì)的篩選 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技 劉洪見 肖三哲 鄭 堅 等 鐵皮石斛栽培基質(zhì)的篩選 浙江 農(nóng)業(yè)科學 胡傳久 李海波 陳友吾 等 香菇廢菌糠栽培鐵皮石斛的研究 食藥用菌 王堯龍 黃璐琦 袁 媛 等 藥用植物轉(zhuǎn)錄組研究進展 中國 中藥雜志 時珍國醫(yī)國藥 年第 卷第 期