長壽花葉片組織培養(yǎng)與離體快繁研究_歐陽先進.pdf

北京農學院學報 nullnullnullnullnull nullnull null nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull 收稿日期 nullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnull 基金項目 北京市教委nullnullnullnull年科研計劃一般項目 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 北京農學院青年科學基金項目 nullnullnullnull nullnullnullnull nullnull 第一作者 歐陽null進 碩士生 主要從事植物組織培養(yǎng)及多肽設計合成研究 null nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnull 通信作者 常明明 講師 博士 主要從事植物組織培養(yǎng)及多肽設計合成研究 null nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 長壽花葉片組織培養(yǎng)與離體快繁研究 歐陽先進 郭婷婷 康 null 旭 劉悅萍 常明明 null 北京農學院生物與資源環(huán)境學院 農業(yè)農村部華北都市農業(yè)重點實驗室 北京 nullnullnullnullnullnull 摘 null 要 目的 快速擴繁長壽花優(yōu)良品種 建立長壽花葉片離體組織繁殖體系 方法 以長壽花幼嫩葉片為 外植體 考察null菌方法對葉片再生能力的影響 比較培養(yǎng)基中激素nullnullnull和null nullnullnull 的質量濃度對長壽花葉片愈傷 組織的誘導及不定芽生根的影響 結果 長壽花幼嫩葉片的最佳消毒方法為nullnull次氯酸鈉溶液消毒nullnullnullnullnull 無 菌水沖洗null次 nullnullnull乙醇消毒nullnullnull 再次用無菌水沖洗null次后null菌完成 最適愈傷組織誘導培養(yǎng)基是nullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnull null 愈傷組織誘導率達 nullnullnullnullnull 最適分化培養(yǎng)基是 nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null 叢芽分化率達 nullnullnullnullnull 最適生根培養(yǎng)基是 null nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull null 生根率達 nullnullnullnullnull 經煉苗成活率高達 nullnullnull以上 結論 該研究建立長壽花組織培養(yǎng)的再生體系 誘導率 出芽率 生根率及移栽成活率均達到 nullnullnull 以上 顯著縮短移栽時間 有效降低繁殖成本 關鍵詞 長壽花 null菌時間 激素 組織培養(yǎng) 離體快繁 中圖分類號 nullnullnull null 文章編號 nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull文獻標志碼 nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnull null nullnull null null null nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull 長壽花 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 又稱圣誕伽 藍菜 紅景天 壽星花 景天科伽藍菜屬多年生肉質 草本植物 null 其莖直立 植株矮小 葉片肉質交互對 生 葉片中心常為深綠色 邊緣略薄呈紅色 花色多 nullnullnullnull 年第 null 期 歐陽null進 等 長壽花葉片組織培養(yǎng)與離體快繁研究 nullnullnull 樣 開花時花朵擁null成團 花期較長null nullnullnullnullnullnull null 具有極高的觀賞性 null 是中國花卉市場的主流盆栽 花卉 null 長壽花在溫暖 陽光充足 排水良好 通風 設施完善 土壤疏松肥沃的環(huán)境中生長為佳 具有 較好的市場前景 null 由于長壽花只開花不結果實 目前主要采用無性培育法進行扦插繁殖 但長期的 無性繁殖易導致病毒在植株體內蓄積 影響產品品 質 null 植物組培技術具有外植體遺傳背景一致 生 長周期短 生長過程條件可控 同時可以大幅提高 繁殖速度 長壽花作為觀賞類花卉 市場需求量 高 研究長壽花組織培養(yǎng)和離體快繁技術 可以保 證長壽花優(yōu)良性狀穩(wěn)定遺傳 可快速 高效的繁育 種苗 null 目前 對長壽花的組織培養(yǎng)研究較多 一般 采用長壽花幼嫩葉片和莖段作為外植體 探討外植 體消毒方法 激素質量濃度及不同移栽培養(yǎng)對長壽 花組織培養(yǎng)的影響 null nullnullnull 在植物組織培養(yǎng)過程中有 三種情況可導致污染 外植體消毒不徹null 空白培 養(yǎng)基污染和無菌操作導致的污染 該研究從外植 體null菌角度探討降低植物組培污染率的方法 眾 所周知縮短消毒時間污染率會大幅提升 然而并不 是消毒時間越長越好 延長消毒時間null可有效降低 污染率 但會導致外植體受到損傷 褐化率顯著升 高 不利于愈傷組織的形成和誘導不定芽 該研究 從不同消毒劑時間對消毒效果進行比較 同時 同 株植物不同器官繁殖能力有所不同 丁雪珍 nullnull 研究 結果表明長壽花離體快繁適宜的外植體為幼嫩葉 片和莖段 在 nullnullnullnullnullnullnullnullnull null 與 nullnullnullnullnullnullnullnull null 組 合下 長壽花葉片分化率最高 為 nullnullnullnullnull 愈傷組織 發(fā)生率為 nullnullnull 用 nullnullnullnullnullnullnullnullnull null 與 nullnullnullnullnullnullnullnull null 的激素組合培養(yǎng)長壽花莖段時 不僅分化率高 而 且分化芽數量多 分化率為 nullnullnull 魏null菲 nullnull 利用長 壽花葉片 莖段進行組織培養(yǎng) 當以長壽花葉片作 為外植體時 第 nullnull 天就可以形成愈傷組織 而莖段 在第 nullnull 天nullnullnull能形成愈傷組織 基于此 該研究 采用長壽花葉片作為外植體 主要null繞外植體的處 理 培養(yǎng)基配方的選取 培養(yǎng)過程及條件 組培苗的 馴化和移栽等環(huán)節(jié) 希望通過調整激素質量濃度 提高長壽花各生產環(huán)節(jié)的繁殖成功率 從而縮短長 壽花快速擴繁時間 為長壽花組培育苗提供參考 方法 nullnull 材料和方法 nullnullnull 材料和培養(yǎng)條件 供試材料為花卉市場 北京三旗百匯農貿花卉 市場 購買的優(yōu)質長壽花 放置于北京農學院組培 中心的組培室內 培養(yǎng)條件 溫度 nullnullnull 光照強度 nullnullnullnullnullnullnull 每日光照 nullnullnull 選取生長健null 無病蟲害 的幼嫩葉片 null 盆 每盆選取null nullnull 片葉片 為外植體 進行組織培養(yǎng)相關研究 nullnullnull 方 null 法 nullnullnullnull 培養(yǎng)基的配制 nullnullnull 培養(yǎng)基或 null nullnullnull 培養(yǎng) 基中加入不同質量濃度的 nullnullnullnull 和 nullnullnull 培養(yǎng)基中 蔗糖 nullnullnull null 瓊脂 nullnull null nullnullnullnull null 的 nullnullnullnull 溶液調 節(jié)培養(yǎng)基 nullnull 值 使培養(yǎng)基 nullnull 值為 nullnullnull 培養(yǎng)基進 行分裝 放入null菌鍋中null菌 配制的培養(yǎng)基種類及 相應的激素質量濃度如表 null 所示 表null null 培養(yǎng)基種類和激素質量濃度對照表 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 培養(yǎng)基種類 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null 愈傷組織誘導培養(yǎng)基 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull 分化培養(yǎng)基 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull 生根培養(yǎng)基 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnull nullnullnull nullnull null nullnull nullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnull 培養(yǎng)基在配制過程中應邊測 nullnull 值邊攪拌 注 意控制 nullnull 值 使null菌后的 nullnull 值為 nullnullnull nullnull 值過 小易導致培養(yǎng)基null菌冷null后不凝固 nullnull 值過大則 容易導致培養(yǎng)基易開裂 nullnullnullnull 長壽花葉片的處理 null 摘取長壽花幼嫩葉片 作為外植體 自來水沖洗 nullnullnullnullnull 洗去葉片表面灰 塵 洗潔精溶液浸泡 nullnullnullnull 自來水沖洗 nullnullnullnull 分 組null菌 將葉片平均分成 null 組 用 nullnull 次氯酸鈉溶 液進行消毒 消毒時間分別為 null nullnull 和 nullnullnullnullnull 用無 菌水沖洗 null 次 每組內將葉片分成 null 份 分別用 nullnullnull 乙醇消毒 nullnull nullnull 和 nullnullnull 再次用無菌水沖洗 null 次 濾紙吸干水分 null菌完成 將葉片切成null nullnullnull null 接種于培養(yǎng)瓶中 接種后放置培養(yǎng)室內進行培養(yǎng) 培養(yǎng)室溫度 nullnullnull 光照強度 nullnullnullnullnullnullnull 每日光照 nullnull null 每瓶接種 null 個外植體 每組 nullnull 瓶 共分 null 組 表 null nullnull 后統(tǒng)計污染率 nullnullnull 后注意觀察培養(yǎng)瓶中外 nullnullnull 北 null 京 null 農 null 學 null 院 null 學 null 報 第 nullnull 卷 植體的生長狀況 篩選最佳消毒方法 nullnullnullnull 愈傷組織的誘導 null 外植體經null菌處理后 將 已null菌的葉片剪成null nullnullnull null 的小塊 接種到愈傷組 織誘導培養(yǎng)基上 接種后將材料放置培養(yǎng)室內進 行培養(yǎng) 培養(yǎng)室溫度 nullnullnull 光照強度 nullnullnullnullnullnullnull 每日 光照 nullnullnull 每瓶接種 null 個外植體 每組 nullnull 瓶 表 null nullnullnull 后觀察不同激素質量濃度培養(yǎng)基中愈傷誘導 率 記錄 篩選最適愈傷組織誘導培養(yǎng)基配方 nullnullnullnull 愈傷組織分化生芽 null 挑選疏松 健null的愈傷 組織接種到分化培養(yǎng)基上 接種后將材料放置培養(yǎng) 室內進行培養(yǎng) 培養(yǎng)室溫度 nullnullnull 光照強度 nullnullnullnullnull nullnull 每日光照 nullnullnull 每瓶接種 null 個外植體 每組 nullnull 瓶 表 null nullnull 后觀察出芽情況 nullnullnull 后觀察不同激素 質量濃度培養(yǎng)基中愈傷組織的分化率 記錄 篩選 最適分化培養(yǎng)基配方 nullnullnullnull 不定芽生根 null 當 nullnullnull 中的不定芽生長到 null nullnull nullnull時 選擇生長狀態(tài)好的長壽花無根苗轉入 生根培養(yǎng)基中 以 nullnull 為基本培養(yǎng)基或 null nullnullnull 為 生根培養(yǎng)基 考察不同質量濃度 nullnullnull nullnullnullnull null 和 nullnullnullnull null 對長壽花無根苗生根的影響 接種后將 材料放置培養(yǎng)室內進行培養(yǎng) 培養(yǎng)室溫度 nullnullnull 光 照強度 nullnullnullnullnullnullnull 每日光照 nullnullnull 每瓶接種 null 個長壽 花無根苗 每組 nullnull 瓶 表 null nullnull 后觀察不同激素 質量濃度培養(yǎng)基中無根苗的生根率 記錄 篩選最 適生根培養(yǎng)基配方 nullnullnullnull 組培苗的馴化與移栽 null 移栽前將含有生根 苗的培養(yǎng)瓶移到自然光照鍛煉 nullnull 讓組培苗接受強 光的照射 再開口煉苗 nullnull 以適應自然條件和溫度 從培養(yǎng)瓶中選取根較nullnull的幼苗 自來水沖凈根部 殘留的培養(yǎng)基 轉移至null菌后的培養(yǎng)土中 培養(yǎng)土 組成為蛭石和腐殖土質量比為 nullnullnull nullnullnullnull 數據計算與分析 null 污染率 null null 污染的外 植體數 接種外植體總數 愈傷組織誘導率 null null 愈傷組織個數 接種外植體數 分化率 null null 分化 苗長出個數 接種外植體總數 生根率 null 生根數 接 種外植體數 所有數據均采用 nullnullnullnullnull 軟件對 null 次重 復試驗的平均值進行數據分析 nullnull 結果與分析 nullnullnull 消毒時間對外植體污染率的影響 以 nullnull 為培養(yǎng)基 長壽花幼嫩葉片為外植體 采 用 nullnull 次氯酸鈉和 nullnullnull 乙醇對外植體進行消毒處 理 nullnull 后統(tǒng)計污染率 nullnull 次氯酸鈉和 nullnullnull 乙醇均 可有效降低污染率 且隨著消毒時間延長污染率呈 明顯下降趨勢 nullnullnull 后當 nullnull 次氯酸鈉null菌時間大 于 nullnullnullnullnull nullnullnull 乙醇null菌時間大于 nullnullnull 時 由于消 毒時間過長導致外植體褐化 生長緩慢 nullnull 次氯 酸鈉消毒 nullnullnullnullnull nullnullnull 乙醇消毒 nullnullnull 為最佳消毒方 法 該消毒方法可有效控制污染率在 nullnullnull 以內 同 時有效控制褐化率 保證外植體良好的生長狀態(tài) 表 null 表null null 消毒時間對外植體生長的影響 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 序號 nullnullnullnullnullnull nullnull次氯酸鈉 nullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnull乙醇 null nullnullnullnullnullnullnullnullnull 污染樣品數 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 污染率 null nullnullnullnulln