巨峰 葡萄細胞分裂素響應調節(jié)因子VlRR5的克隆與表達分析.pdf

園藝學報 2021 48 8 1437 1445 Acta Horticulturae Sinica doi 10 16420 j issn 0513 353x 2020 0668 http www ahs ac cn 1437 收稿日期 2021 02 23 修回日期 2021 06 07 基金項目 國家自然科學基金項目 31701893 32072517 國家重點研發(fā)計劃項目 2018YFD1000105 河南省高?？萍紕?chuàng)新人才項 目 21HASTIT035 河南省高等學校青年骨干教師培養(yǎng)計劃項目 No 81 河南省高?？萍紕?chuàng)新團隊支持計劃項目 21IRTSTHN021 洛 陽市科技發(fā)展計劃項目 2101102A 通信作者 Author for correspondence E mail yuyihe 巨峰 葡萄細胞分裂素響應調節(jié)因子 VlRR5 的克隆與表達分析 邊 璐 郭大龍 于可可 韋同路 裴茂松 劉海楠 余義和 河南科技大學園藝與植物保護學院 河南洛陽 471023 摘 要 葡萄在生長發(fā)育過程中會出現 3 次落果高峰 巨峰 葡萄的落果現象更為嚴重 從 巨 峰 葡萄中克隆得到 1 個細胞分裂素響應調節(jié)因子 VlRR5 該基因有 1 個磷酸受體結構域 REC 和 1 個 MYB 樣 DNA 結合結構域 cDNA 全長 2 597 bp 編碼 693 個氨基酸 定位在 4 號染色體上 亞細胞定位 在細胞核中 酵母轉化試驗中 轉入 pGBKT7 VlRR5 的酵母菌可以在 SD Trp Ade His X Gal 缺陷型 培養(yǎng)基上正常生長且顯藍色 證明 VlRR5 具有轉錄激活活性 熒光定量 PCR 分析顯示 VlRR5 的表達具 有組織特異性 在葉和莖中表達量較高 在幼果發(fā)育階段呈現先升高后降低的趨勢 并且在外源細胞分 裂素 CPPU 處理后表達量上升 在細胞分裂素合成抑制劑洛伐他汀處理后表達量下降 這些結果表明 VlRR5 可以響應外源細胞分裂素處理 在細胞分裂素介導葡萄坐果過程中發(fā)揮重要作用 關鍵詞 葡萄 細胞分裂素 CPPU 細胞分裂素響應調節(jié)因子 VlRR5 中圖分類號 S 663 1 文獻標志碼 A 文章編號 0513 353X 2021 08 1437 09 Cloning and Expression Analysis of the Cytokinin Response Regulator VlRR5 in Kyoho Grapevine BIAN Lu GUO Dalong YU Keke WEI Tonglu PEI Maosong LIU Hainan and YU Yihe College of Horticulture and Plant Protection Henan University of Science and Technology Luoyang Henan 471023 China Abstract There are three fruit dropping peaks in grape growth and development Grape fruit dropping phenomenon is more serious in Kyoho grapevine In this study a cytokinin response regulator VlRR5 was cloned from Kyoho grapevine which has a phosphoric acid receptor domain REC and a MYB like DNA binding domain Sequence analysis revealed that cDNA of VlRR5 was 2 597 bp in length encoding 693 amino acids and located on chromosome 4 of grape Subcellular localization assay showed that VlRR5 was localized in the nucleus The yeast transformed into pGBKT7 VlRR5 could grow normally and turn blue on SD Trp Ade His X Gal deficient medium which proved that VlRR5 was a transcription factor with transcriptional activation activity By quantitative real time PCR analysis VlRR5 was characterized by tissue specific expression and showed high expression level in leaf and stem which was Bian Lu Guo Dalong Yu Keke Wei Tonglu Pei Maosong Liu Hainan Yu Yihe Cloning and expression analysis of the cytokinin response regulator VlRR5 in Kyoho grapevine 1438 Acta Horticulturae Sinica 2021 48 8 1437 1445 increased and then decreased in the development stage of young fruit The expression level increased after treatment with exogenous cytokinin and decreased after treatment with the cytokinin synthesis inhibitor lovastatin These results indicated that VlRR5 can respond to cytokinin and plays an important role in participating in cytokinin to improve the fruiting rate of grape Keywords grapevine cytokinin CPPU cytokinin response regulators VlRR5 葡萄 Vitis vinifera L 作為世界性第二大水果被廣泛地種植和加工利用 為人類創(chuàng)造了明顯的 經濟 生態(tài)和社會效益 Yu et al 2019a 鮮食葡萄中以巨峰系葡萄栽培面積最為廣泛 巨峰系葡 萄品種存在較嚴重的落花落果現象 尤其是盛花后 8 9 d 為第 1 次生理落果期 有些植株落果率高 達 50 CPPU N 2 chloro 4 pyridyl N phenylurea 是一種細胞分裂素類的植物生長調節(jié)劑 具有顯 著促進植物根 莖 葉生長的作用 CPPU 不僅能促進葡萄等果實膨大 提高其產量 也有促進坐 果的作用 并且可以促進果實早熟 樊彪和趙江哲 2017 植物體內細胞分裂素主要是通過一種類似于細菌中雙元組分系統(tǒng)的途徑將信號傳遞至下游元 件的 梁朋 等 2002 主要分為 3 個部分 首先是細胞分裂素受體組氨酸激酶 histidine kinase HK 與細胞分裂素結合后自磷酸化 并將磷酸基團由激酶區(qū)的組氨酸轉移至信號接收區(qū)的天冬氨酸 接著天冬氨酸上的磷酸基團被傳遞到胞質中的磷酸轉運蛋白 histidine phosphotransfer protein HP 上 磷酸化的 HP 進入細胞核并將磷酸基團轉移到 A 型和 B 型反應調節(jié)因子 response regulator RR 上 進而調節(jié)下游的細胞分裂素 Sheen 2002 Schaller et al 2011 Ramireddy et al 2013 RR 是細胞分裂素信號傳導途徑中能夠參與磷酸基團的轉移進而調節(jié)下游細胞分裂素反應基因表達 的關鍵基因 RR 在參與植物生長發(fā)育 晝夜節(jié)律等發(fā)揮重要作用 在擬南芥中 A 型 ARR7 和 ARR15 與生長素信號相互作用 在干細胞特化過程中起重要作用 Hua et al 2012 ARR4 參與調節(jié)擬南 芥的晝夜節(jié)律 直接調節(jié) phyB 的活性狀態(tài) 正向調節(jié)紅光信號 Salom et al 2005 最近有研究 表明 擬南芥中 ARR16 通過抑制細胞分裂素信號來控制雌蕊的生長 Reyes Olalde et al 2017 在 水稻中 獨腳金內酯突變體中細胞分裂素含量明顯升高 編碼細胞分裂素氧化酶基因 OsCKX9 的表 達會促進細胞分裂素降解 通過 1 個 A 型細胞分裂素響應因子 OsRR5 調控幼苗的分蘗 株高和穗 大小 Duan et al 2019 除此之外 RR 在植物非生物脅迫中也起重要作用 在擬南芥中 EIN3 通 過直接與啟動子中的特異區(qū)域來負調控冷相關基因 CBF 和 A 型 ARR5 ARR7 ARR15 過表達這些 ARR 基因會增強植物的耐寒性 這些結果說明乙烯對冷信號的負調控至少部分是通過 EIN3 對冷調 控的 CBF 和 A 型 ARR 基因的直接轉錄調控實現的 Huang et al 2018 前期對 巨峰 葡萄花序進行 CPPU 處理 在果實發(fā)育的不同時期采樣然后進行轉錄組測序 通過轉錄組分析發(fā)現不同時期處理與對照之間的差異基因中包括很多被注釋為雙元信號感受器 two component response regulator 的基因 本研究中 克隆了該家族中的 1 個成員 VlRR5 VIT 04s0008g05900 t01 通過熒光定量測定該基因在 巨峰 葡萄不同組織 不同發(fā)育時期幼果的表達 情況 通過亞細胞定位和酵母單雜交試驗明確 VlRR5 是否是 1 個具有轉錄激活活性的轉錄因子 初 步分析 VlRR5 的表達特異性和參與響應細胞分裂素調控葡萄幼果發(fā)育的作用 這些研究一方面可為 研究細胞分裂素影響葡萄坐果的分子機制打下基礎 也為其他果實坐果分子機制提供理論參考 另 一方面為生產中合理使用 CPPU 提供理論依據 邊 璐 郭大龍 于可可 韋同路 裴茂松 劉海楠 余義和 巨峰 葡萄細胞分裂素響應調節(jié)因子 VlRR5 的克隆與表達分析 園藝學報 2021 48 8 1437 1445 1439 1 材料與方法 1 1 植物材料及其處理 以河南省洛陽市偃師市葡萄栽培基地 東經 112 79 北緯 34 73 海拔 135 m 的 巨峰 葡 萄作為試驗材料 分別用 10 mg L 1 CPPU 加 Silwet 77 表面活性劑 終濃度 0 03 體積比 和 40 mmol L 1 細胞分裂素合成抑制劑洛伐他汀 Lov 做浸蘸花序處理 以清水加 Silwet 77 表面活 性劑 終濃度 0 03 處理為對照 處理時間為盛花后 5 d 2018 年 5 月 25 日 浸蘸 10 s 于 2018 年 5 月 25 26 27 29 日和 6 月 2 日采樣 并于 2018 年 5 月對葡萄不同組織 根 莖 葉 花序 卷須 進行采樣 采樣后迅速置于液氮速凍 后在 80 超低溫冰箱保存?zhèn)溆?1 2 RNA 的提取和熒光定量試驗 使用 RNA prep 純植物試劑盒 天根 北京 中國 提取總 RNA 總 RNA 用 RNase free DNase 處理 TaKaRa 去除基因組的 DNA 污染 用 PrimeScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit TaKaRa 合成 cDNA 第 1 鏈 用 SMARTer TM RACE cDNA Amplification Kit 進行反轉錄 使用 SYBR Premix Ex Taq TaKaRa 和基因特異引物 表 1 在 Bio Rad IQ5 Real Time PCR 檢測系統(tǒng) Bio Rad Laboratories Hercules CA USA 進行 qRT PCR Yu et al 2019b 1 3 基因克隆及載體構建 以 巨峰 葡萄總 RNA 反轉錄的 cDNA 產物為模板 用 VlRR5 特異引物 表 1 進行 PCR 將 PCR 產物在 1 的瓊脂糖凝膠上進行電泳 觀察條帶位置正確后在特異引物上添加同源接頭合成 新的引物 表 1 用新合成的引物再次進行 PCR 將 PCR 產物進行凝膠電泳 用膠回收試劑盒切 膠回收 對亞細胞定位載體 酵母單雜交載體 用限制性核酸內切酶酶切 用同源重組試劑盒把線 性化載體和膠回收產物進行同源重組 進行大腸桿菌轉化 挑選陽性克隆搖菌 菌液 PCR 檢測 表 1 引物列表 Table 1 List of primers 引物名稱基因 Primer 堿基序列 5 3 Primer sequence QT VlRR5 F TGGGTATGCATTGCCTTTCT R GAAGAAGGAAGCTCTGCGTTT VlRR5 F ATGACAGTTGAACCGAGGGT R TTAATGGAAAAGAACTTGAT Y1H RR5 F ATGGCCATGGAGGCCGAATTCATGACAGTTGAACCGAGGGT R ATGCGGCCGCTGCAGGAATTCTTAATGGAAAAGAACTTGAT LS RR5 F AGAGAACACGGGGGACTCTAGAATGACAGTTGAACCGAGGGT R CTTCTCCCTTACCCATGGTACCTTAATGGAAAAGAACTTGAT 1 4 VlRR5 的生物信息分析 在 Ensembl Plants 數據庫中下載 VlRR5 序列 將 VlRR5 蛋白質序列在 NCBI 數據庫中進行 Blast 用 ClustalX 對氨基酸序列進行比對 用 MEGA7 做系統(tǒng)進化樹分析 用 ExPASy 網站 https web expasy org cgi bin compute pi pi tool 分析氨基酸序列 蛋白質分子量和等電點 用 ExPASy 網站上 的 PROSITE https prosite expasy org 預測保守結構域 用在線網站 PlantCARE http bioinformatics psb ugent be webtools plantcare html 預測 VlRR5 的順式作用元件 Bian Lu Guo Dalong Yu Keke Wei Tonglu Pei Maosong Liu Hainan Yu Yihe Cloning and expression analysis of the cytokinin response regulator VlRR5 in Kyoho grapevine 1440 Acta Horticulturae Sinica 2021 48 8 1437 1445 1 5 亞細胞定位 將 pBI121 VlRR5 GFP 轉化至大腸桿菌中 以 pBI121 GFP 作為陰性對照 挑選陽性克隆搖菌 大量抽提質粒 純化質粒 包埋金粉 點于微粒載膜中央 用基因槍對洋蔥表皮進行轉化 在高滲 培養(yǎng)基上培養(yǎng)過夜 轉至等滲培養(yǎng)基培養(yǎng) 24 h 在激光共聚焦顯微鏡下觀察熒光 1 6 酵母單雜交 將 pGBKT7 空載體 陰性對照 以 pGBKT7 GAL4 陽性對照 pGBKT7 VlRR5 分別轉化至 AH109 酵母菌株中 分別涂布在 SD Trp SD Trp Ade His SD Trp Ade His X Gal 缺陷型培 養(yǎng)基上 避光放置在 30 恒溫培養(yǎng)箱中 2 3 d 觀察酵母菌生長情況 2 結果與分析 2 1 VlRR5 的克隆及其生物信息 從 EnsmblPlants 數據庫中下載 VlRR5 的序列 設計特異引物 以從 巨峰 葡萄幼果中提取的 RNA 反轉錄成的 cDNA 為模板 通過 PCR 擴增得到 VlRR5 全長序列 序列分析發(fā)現 VlRR5 全長 2 597 bp 編碼 693 個氨基酸 蛋白質理論等電點為 5 97 保守結構域預測發(fā)現在 VlRR5 的 19 134 位具 有 1 個磷酸接收結構域 REC 在 201 260 位具有 1 個 MYB 樣的 DNA 結合域 將 VlRR5 與擬 南芥 水稻 蘋果等物種的 RR 轉錄因子氨基酸序列進行比對 圖 1 進一步確定 圖 1 VlRR5 和其他物種 RR 氨基酸序列比對 A 磷酸接收結構域 REC B MYB 樣 DNA 結合域 Pan 糙葉山麻黃 Md 蘋果 Os 水稻 At 擬南芥 Fig 1 Amino acid sequence alignment of VlRR5 and other species RRs A Phosphoric acid receptor domain REC B MYB like DNA binding domain Pan Parasponia andersonii Md Malus domestica Os Oryza sativa At Arabidopsis thaliana 對 VlRR5 啟動子進行順式作用元件分析 結果 表 2 顯示 VlRR5 的啟動子區(qū)含有光響應 生 長素 脫落酸 茉莉酸和水楊酸響應元件 將 VlRR5 與 Blast 得到的同源序列進行比對 利用 MEGA 制作進化樹 圖 2 VlRR5 與擬南 芥 ARR12 At2g25180 1 同源性為 81 與藍果樹 NsRR5 F0562 007419 1 同源性為 55 通過 STRING 分析可以發(fā)現 VlRR5 與葡萄中 10 個蛋白互作關系較高 其中 VIT 06s0080g00060 VIT 14s0030g00410 VIT 04s0008g00210 VIT 05s0020g02210 VIT 07s0104g00880 VIT 09s0002 g03520 VIT 13s0074g00740 VIT 09s0002g06960 均被 GO 注釋為具有組氨酸磷酸轉移激酶活性 結合組氨 邊 璐 郭大龍 于可可 韋同路 裴茂松 劉海楠 余義和 巨峰 葡萄細胞分裂素響應調節(jié)因子 VlRR5 的克隆與表達分析 園藝學報 2021 48 8 1437 1445 1441 酸激酶 參與細胞分裂素激活信號途徑 磷酸信號轉導系統(tǒng) VIT 14s0030g02200 被注釋為與激酶 結合 具有蛋白質異二聚活性 參與細胞對葡萄糖 脫落酸和饑餓的響應 以及對晝夜節(jié)律的響應 而 VIT 03s0091g00290 被注釋為具有 DNA 結合能力和金屬離子結合能力 表 2 VlRR5 啟動子區(qū)域的順式作用元件 Table 2 The cis acting elements in promoters of VlRR5 順式作用元件 cis acting element 功能 Function 序列 Sequence 數量 Amount gGTAAAGAAA 脫落酸響應 Abscisic acid responsiveness ACGTG 1 ARE 厭氧誘導 Anaerobic induction AAACCA 3 AuxRR core 生長素響應 Auxin responsiveness GGTCCAT 1 CAT box 分生組織表達 Meristem expression GCCACT 1 CGTCA motif 茉莉酸甲酯響應 MeJA responsiveness CGTCA 2 G box 光響應 Light responsiveness TACGTG 2 MBS 參與干旱誘導的 MYB 結合位點 MYB binding site involved in drought inducibility CAACTG 9 Pc CMA2a 光響應元件的一部分 Part of a light responsive element CAGCCAATCACAG 1 TATA box 在轉錄開始 30 左右的核心啟動子元件 Core promoter element around 30 of transcription start TATA 5 TCA element 水楊酸響應 Salicylic acid responsiveness TCAGAAGAGG 1 TGACG motif 茉莉酸甲酯響應 MeJA responsiveness TGACG 2 CAAT box 啟動子和增強子區(qū)域的順式作用元件 Common cis acting element in promoter and enhancer regions CAAAT 49 圖 2 VlRR5 與其他物種 RR 蛋白質的進化樹分析 St 馬鈴薯 Sl 番茄 Os 水稻 Tt 唐松草小銀蓮花 Nn 蓮 At 擬南芥 Ns 藍果樹 Ac 中華獼猴桃 Cs 茶 Cm 香瓜 Cf 川黔千金榆 Pan 山黃麻 Zj 棗 Md 蘋果 Pd 扁桃 Pa 歐洲甜櫻桃 Fig 2 Phylogenetic tree of VlRR5 and RR proteins of other species St Solanum tuberosum Sl Solanum lycopersicum Os Oryza sativa subsp japonica Tt Thalictrum thalictroides Nn Nelumbo nucifera At Arabidopsis thaliana Ns Nyssa sinensis Ac Actinidia chinensis var chinensis Cs Camellia sinensis Cm Cucumis melo Cf Carpinus fangiana Pan Parasponia andersonii Zj Ziziphus jujuba Md Malus domestica Pd Prunus dulcis Pa Prunus avium 2 2 VlRR5 亞細胞定位和轉錄激活活性分析 構建 pBI121 VlRR5 GFP 亞細胞定位重組質粒 用基因槍法將其瞬時表達于洋蔥表皮 在激光 共聚焦顯微鏡下觀察 發(fā)現 VlRR5 定位在細胞核中 圖 3 Bian Lu Guo Dalong Yu Keke Wei Tonglu Pei Maosong Liu Hainan Yu Yihe Cloning and expression analysis of the cytokinin response regulator VlRR5 in Kyoho grapevine 1442 Acta Horticulturae Sinica 2021 48 8 1437 1445 圖 3 VlRR5 的亞細胞定位 Fig 3 Analysis of the localization of the VlRR5 protein 為了解 VlRR5 在參與細胞分裂素調控葡萄坐果中是否發(fā)揮轉錄因子的作用 VlRR5 連接到 pGBKT7 載體轉化至酵母細胞 結果 圖 4 顯示轉入 pGBKT7 VlRR5 pGBKT7 GAL4 以及 pGBKT7 空載體的酵母菌可以在 SD Trp 培養(yǎng)基上生長 轉入 pGBKT7 VlRR5 pGBKT7 GAL4 的酵母菌可 以在 SD Trp His Ade 缺陷型培養(yǎng)基上正常生長 而轉入 pGBKT7 空載體的酵母菌不能在此缺陷型 培養(yǎng)基上生長 同樣的 轉入 pGBKT7 VlRR5 pGBKT7 GAL4 的酵母菌可以在 SD Trp His Ade X Gal 缺陷型培養(yǎng)基上生長且顯藍色 而轉入 pGBKT7 空載體的酵母菌不能在 SD Trp His Ade X Gal 缺陷型培養(yǎng)基上生長 2 3 VlRR5 的表達特性及其對外源細胞分裂素 CPPU 的響應 熒光定量 PCR 結果 圖 5 顯示 VlRR5 在葡萄葉片中表達量最高 其次是莖 而在花序和果 實中的表達量較低 用 CPPU 對葡萄花序處理 從表型 圖 6 A 可以明顯看出對照在處理后 4 和 8 d 落果嚴重 而 CPPU 處理后落果較少 處理后 1 d VlRR5 的表達量與對照相比無差異 處理 后 2 和 4 d 顯著高于對照 總體呈現先升高后降低的趨勢 4 d 時達到峰值 圖 6 B 圖 4 VlRR5 的轉錄激活活性檢測 Fig 4 Transcriptional activation assay of the VlRR5 圖 5 VlRR5 的表達特異性分析 Fig 5 Diverse expression patterns of VlRR5 邊 璐 郭大龍 于可可 韋同路 裴茂松 劉海楠 余義和 巨峰 葡萄細胞分裂素響應調節(jié)因子 VlRR5 的克隆與表達分析 園藝學報 2021 48 8 1437 1445 1443 圖 6 CPPU 處理后葡萄表型 A 及 VlRR5 表達水平 B Fig 6 Grape phenotype A and VlRR5 expression level B after CPPU treatment 0 05 為進一步確認 VlRR5 受細胞分裂素誘導影響葡萄坐果 用細胞分裂素合成抑制劑 Lov 對葡萄花 序進行處理 與對照相比在處理后 4 8 d 落果嚴重 果穗松散 圖 7 A 在 Lov 處理后 1 2 8 d VlRR5 的表達量與對照相比無差異 處理后 4 d 顯著低于對照 圖 7 B 圖 7 細胞分裂素合成抑制劑 Lov 處理后葡萄表型 A 及 VlRR5 的表達水平 B Fig 7 Grape phenotype A and VlRR5 expression level B after inhibitors of cytokinin synthesis Lov treatment 0 05 3 討論 細胞分裂素響應因子是細胞分裂素信號傳導途徑中的關鍵因子 姚繼芳 等 2019 雖然生產 上細胞分裂素已經廣泛用于提高葡萄的坐果率 但是細胞分裂素響應因子在其中發(fā)揮的作用尚不明 確 在擬南芥中 細胞分裂素響應調節(jié)因子可以分為 3 類 A 型 ARR B 型 ARR 以及由 ARR22 和 ARR24 組成的第 3 類 B 型 ARR 除了具有信號接收結構域外 還具有 1 個長長的 C 末端 包含 1 個 MYB 樣 DNA 結合結構域 GARP 結構域 A 型 ARR 具有 1 個信號接收結構域和一小段的 N Bian Lu Guo Dalong Yu Keke Wei Tonglu Pei Maosong Liu Hainan Yu Yihe Cloning and expression analysis of the cytokinin response regulator VlRR5 in Kyoho grapevine 1444 Acta Horticulturae Sinica 2021 48 8 1437 1445 末端和 C 末端 缺少 DNA 結合域 Wallmeroth et al 2019 本研究中在 巨峰 葡萄中克隆得到 1 個細胞分裂素響應調節(jié)因子 VlRR5 結構域分析發(fā)現 VlRR5 具有 1 個磷酸接收結構域 REC 和 1 個 MYB 樣的 DNA 結合域 這表明 VlRR5 是 1 個 B 型 RR 基因 VlRR5 定位于細胞核 且具有轉錄激活活性 說明 VlRR5 是 1 個轉錄因子 這與前人研究成果是 一致的 在擬南芥中 B 型 ARR 基因缺失或者 A 型 ARR 基因過表達的植株表現出和細胞分裂素受體 功能缺失突變體相似的表型 表明 B 型 ARRs 是一類轉錄因子 為細胞分裂素的正調控因子 Nguyen et al 2016 這暗示了 VlRR5 作為 1 個 B 型 RR 轉錄因子在響應細胞分裂素過程中起正調控作用 VlRR5 在葡萄莖中表達量較多 而在小麥中 TaARR1 主要在根和葉中表達 Yang et al 2019 PtRR 和 PtRR10 12d 在楊樹根部 形成層 木質部表達量相對較高 在草莓中 B 型 FvRR8 FvRR9 FvRR10 和 FvRR13 均有組織特異性表達 并且在草莓的根 匍匐莖中表達較多 Yang et al 2016 這證明 VlRR5 與其他物種中的 RR 轉錄因子一樣具有組織特異性 在受到外源細胞分裂素處理后 VlRR5 的表達被迅速誘導 且在處理后 2 4 d 與對照顯著差異 B 型 RR 基因表現出對外源細胞分裂素的響應 如在蘋果中 6 BA 處理后 B 型 MdRRB2 3 MdRRB11 MdRRB5 MdRRB10 基因的表達量受到誘導 Li et al 2017 在梨中 CPPU 處理后 B 型 PpRR3 PpRR6 PpRR7 PpRR8 的表達量均上調 并且隨著時間的推移出現先上升后降低的趨勢 Ni et al 2017 以上結果表明 VlRR5 同其他 B 型 RR 轉錄因子一樣會受到細胞分裂素誘導 同時 VlRR5 的表達量在細胞分裂素合成抑制劑 Lov 處理后 4 d 顯著低于對照 從側面進一步證明了這一結果 CPPU 處理后 4 d 開始 對照組落果嚴重 在細胞分裂素合成抑制劑 Lov 處理后 4 d 開始 落果更為 嚴重 說明處理后 4 d 盛花后 9 d 是 VlRR5 響應細胞分裂素提高葡萄坐果率的關鍵時期 References Duan J Yu H Yu an K Liao Z Meng X Jing Y Liu G Chu J Li J 2019 Strigolactone promotes cytokinin degradation through transcriptional activation of CYTOKININ OXIDASE DEHYDROGENASE 9 in 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