不同干熱處理對西瓜種子帶菌量的研究.pdf

150 150 實驗研究 不同干熱處理對西瓜種子帶菌量的研究 李 曼 河北省衡水市武邑縣職教中心 河北 衡水 053400 摘 要 本實驗以西瓜品種 懶漢地瓜王 種子為材料 研究 65 70 75 不同溫度干熱處理 24 h 后對西瓜種 子帶菌量的影響 實驗結果表明 適宜的干熱處理對表面帶菌的種子滅菌率非常明顯 隨著處理溫度的不 斷升高西瓜種子的帶菌量明顯降低 同一溫度下 不同濃度梯度之間細菌數(shù)量成一定的倍比關系 同一濃 度下 不同溫度之間細菌數(shù)量差異性也十分顯著 65 70 75 三個溫度處理的滅菌率分別是 57 80 95 因此綜合考慮西瓜同一時間不同溫度對滅菌率的影響 適宜于西瓜種子干熱處理的最佳組合是 75 處理 24 h 本實驗為干熱處理廣泛應用在減少西瓜種子帶菌量提供了一些理論依據(jù) 關鍵詞 溫度 干熱處理 西瓜 種子活力 文章編號 ISSN2096 0743 2021 09 0150 1 材料與方法 1 1 供試材料 1 1 1 供試西瓜種子 懶漢地瓜王 西瓜種子 千瑞種業(yè)公司生產(chǎn) 1 1 2 供試培養(yǎng)基 NA 培養(yǎng)基 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g 氯化鈉 5g 瓊脂 an20g 1000ml 水 NB 培養(yǎng)基 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g 氯化鈉 5g 1000ml 水 1 2 實驗儀器 滅菌鍋 SQ810C 恒溫培養(yǎng)箱 BSG 250 搖床 HNY 2102C 干燥箱 DZF 6090 1 3 實驗方法 1 3 1 西瓜種子的處理 采用干熱處理法將種子在陽光下暴曬 使其充分干 燥 然后在恒溫干燥箱內(nèi)進行處理 準備 3 個干燥箱 設 65 70 75 3 個溫度處理 每處理 3 次重復 每重 復 3 粒種子 將種子置于滅菌培養(yǎng)皿中 干燥箱內(nèi)烘干 24h 對照 CK 為不經(jīng)過干熱處理的種子 1 3 2 培養(yǎng)基的選擇 采用了水和 NB 培養(yǎng)液兩種培養(yǎng)液對本實驗進行了研 究 用平板涂布法對兩種培養(yǎng)液培養(yǎng)出的菌落進行了比較 實驗 根據(jù)得出的結果 在正式實驗中選用 NB 培養(yǎng)基更 加合理 確保實驗的準確性和嚴謹性 1 3 3 菌懸液的培養(yǎng) NA 和 NB 培養(yǎng)基的配制方法是將幾種物質分別稱量 后放入 1000 ml 燒杯中 按比例加水 定容 攪勻 分裝 放入 121 高壓滅菌鍋中滅菌 15 min 干熱處理后的種子 在超凈工作臺中接到滅好菌的三角瓶中 超凈作臺紫外線 滅菌 15 分鐘 滅菌結束后吹風 10 分鐘左右后進行實驗操 作 采用振蕩培養(yǎng)法將不同溫度干熱處理后的種子加入到 滅菌的 NB 培養(yǎng)液中 160 rpm 的搖床中振蕩培養(yǎng) 24 h 1 3 4 西瓜種子帶菌量的測定 將滅菌凝固后的 NA 培養(yǎng)液在微波爐內(nèi)加熱 直至 呈液態(tài) 在超凈工作臺中倒入培養(yǎng)皿中 然后吸取 1 ml 菌懸液依次稀釋 10 1 10 2 10 3 10 4 和 10 5 倍 再從 10 3 10 4 10 5 的稀釋液中取 100 L 在培養(yǎng)基上涂板 用三角玻璃環(huán)涂勻 每個處理 3 皿 以未進行干熱處理的 種子作為對照 待涂好板的培養(yǎng)基表面風干后 倒置于 28 恒溫培 養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng) 24 h 觀察并用活細胞計數(shù)法計數(shù) 100 對照滅菌數(shù) 處理滅菌數(shù) 對照滅菌數(shù) 滅菌效果 1 4 數(shù)據(jù)處理 用 Excel 2007 軟件對所有數(shù)據(jù)進行整理作圖 并將得 到的實驗數(shù)據(jù)用 SPSS 22 0 進行分析 2 結果與分析 2 1 培養(yǎng)基質的測定結果 為了保證實驗的準確性和嚴謹性 我們采用了以水和 NB 培養(yǎng)液兩種培養(yǎng)液對本實驗進行了研究 用平板涂布 法對兩種培養(yǎng)液培養(yǎng)出的菌落進行了比較實驗 結果如圖 3 1 所示 NB培養(yǎng)液 水 圖3 1 選擇培養(yǎng)液對照 從兩種培養(yǎng)液的成分來看 其中 NB 培養(yǎng)液含有牛肉 膏 蛋白胨 氯化鈉 營養(yǎng)成分相對較多 為菌落生長提 151 151 實驗研究 供了較好的環(huán)境 而以水作為培養(yǎng)液 沒有營養(yǎng)成分 菌 落生長緩慢 得出的結果顯而易見 NB 培養(yǎng)液生長出來 的菌落非常多 而水培養(yǎng)出來的菌落比較稀少 綜上 NB 培養(yǎng)液是適合本實驗的培養(yǎng)液 但是菌落數(shù)量龐大 需要對菌懸液進行更大的倍比稀釋 保證實驗的準確性 2 2 不同溫度干熱處理下對種子帶菌量的測定 在預備實驗中 我們選擇了 10 1 10 2 10 3 得到的 細菌菌落非常多 難以統(tǒng)計 二次實驗 在制備菌懸液時 沒有選用培養(yǎng)液培養(yǎng) 雖然滅菌率顯著 但是得到的結果 沒有對比性 在我們不斷的測試中 選擇了在制備菌懸液 時選擇 NB 培養(yǎng)液 然后選擇 10 3 10 4 10 5 的稀釋液 得到的數(shù)據(jù)如表 表3 1 處理后種子帶菌數(shù)量 溫度 濃度 重復 1 個 重復 2 個 重復 3 個 平均數(shù)量 個 65 10 3 47500 45800 47700 47000 10 4 4200 4450 4850 4500 10 5 465 450 485 366 70 10 3 13500 15400 14900 14600 10 4 1300 1450 1750 1500 10 5 165 180 150 166 75 10 3 3950 4300 4150 4100 10 4 400 375 365 380 10 5 40 21 39 33 CK 10 3 78000 86000 89500 84500 10 4 7900 8300 900 8400 10 5 850 915 920 895 如表 3 1 所示 6 5 7 0 和 7 5 各個溫度下的 10 3 10 4 10 5 三個濃度梯度細菌數(shù)量由低到高成一定的 倍比關系 符合實驗結果的發(fā)展規(guī)律 同一濃度下 各個 溫度梯度細菌的數(shù)量差異性也非常顯著 在 65 24 h 干熱處理下 西瓜種子帶菌量還較高 與對照相比 滅菌率 57 在 70 24 h 干熱處理溫度下 西瓜種子帶菌量顯著降低 滅菌率 80 在 75 24 h 干 熱處理溫度下 西瓜種子滅菌已經(jīng)非常明顯 滅菌率高達 95 以 10 5 為例 用 SPSS22 0 做方差分析 結果如下表 表3 2 10 5 濃度下菌落個數(shù)分析 溫度 重復 1 個 重復 2 個 重復3 個 均數(shù) 個 標準差 P 0 05 65 465 450 485 466 67 17 56 a 70 165 180 150 165 00 15 b 75 40 21 39 33 33 10 69 c CK 850 915 920 895 00 39 05 注 在 P 0 05 水平上同列數(shù)據(jù)后標不同小寫字母 表示差異顯著 以 10 5 濃度做方差分析研究不同干熱處理對西瓜種 子帶菌量影響的結果表明 如表 3 2 所示 65 70 和 75 的處理和對照比較均有顯著性差異 同一時間下三個 溫度的干熱處理對西瓜種子帶菌量均有不同程度的影響 其中 75 24 h 干熱處理溫度對西瓜種子帶菌量抑制 效果最顯著 平均細菌數(shù)量 33 個 其次是 70 24 h 對其 的抑制效果 平均細菌數(shù)量 165 個 與對照組相比效果最 差的是 65 24 h 的處理 其平均細菌數(shù)量還存在 467 個 帶菌量檢測結果表明 同一時間下不同溫度組合干熱 處理對種子表面病菌的滅菌率明顯 隨著干熱處理溫度升 高 滅菌率明顯增加 帶菌量下降 表明西瓜種子帶菌量 隨著干熱處理溫度升高呈顯著降低趨勢 3 結論與討論 3 1 結論 由上面得到的結果表明 懶漢地瓜王 西瓜種子 經(jīng) NB 培養(yǎng)液培養(yǎng)后 干熱處理對西瓜種子的滅菌率明 顯 隨著干熱處理溫度升高 滅菌率明顯 65 70 和 75 三個處理溫度的滅菌率分別是 57 80 和 95 所以 在實際生產(chǎn)中 75 24 h 的干熱處理是最適宜西 瓜種子的處理 本實驗為干熱處理廣泛應用在減少西瓜種 子帶菌量提供了一些理論依據(jù) 3 2 討論 現(xiàn)有選擇的培養(yǎng)基在種子實際帶菌量較低的情況下 由于培養(yǎng)基的靈敏度有限或實驗不規(guī)范導致培養(yǎng)基上長出 來的全部是假陽性菌落 常?？赡軐е聶z測不到真實的病 菌 導致錯誤檢測結果 所以注意自身安全 規(guī)范實驗操 作 減少實驗誤差 在研究中發(fā)現(xiàn)控制和消除病害的早期 污染源是預防植物病害的關鍵技術 但目前還沒有發(fā)現(xiàn)發(fā) 生西瓜病害的流行規(guī)律 病害的早期污染源等 有研究結 果表明 由于感染病菌的主要原因是接種源是感染病菌的 種子 但是 關于病菌的種子的帶菌機制的研究還沒有完 善 通過什么方法處理帶菌的種子是最有效的 這些都是 生產(chǎn)上待解決的問題 今后西瓜的重要種傳病害研究方向集中于以下幾個方 面 深入了解種子如何感染病菌 病菌的種子傳播和生存 機制 有助于完善種子檢測的規(guī)程和處理種子的技術 現(xiàn) 在的檢測方法在應用中各有優(yōu)點和缺點 發(fā)展快速 準確 的可以確認病菌的活力的高質量檢測方法 在種子處理中 找到能夠提高種子的活力和易于操作 普及的方法同時有 效地去除西瓜種子內(nèi)部的病菌 建立完善的種子采后保存 處理規(guī)程 參考文獻 1 浙江農(nóng)業(yè)大學主編 蔬菜栽培學各論 M 北京 中國農(nóng)業(yè) 出版社 2000 2 李逸龍 西瓜種傳細菌性果斑病的快速檢測及種子消毒 方法的研究 D 上海 華東師范大學 2016